攜帶VEGF基因的內皮祖細胞功能改變及在損傷血管內膜修復中的作用.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文攜帶VEGF基因的內皮祖細胞功能改變及在損傷血管內膜修復中的作用姓名：趙剛申請學位級別：博士專業(yè)：內科學（心血管?。┲笇Ы處煟狐S嵐20071101第三軍醫(yī)大學博士學位論文內皮祖細胞。將構建的攜帶人VEGF165基因的pcDNA3質粒轉染至EPcs，觀察基因修飾對EPcs的粘附、遷移、增殖及向內皮細胞分化的影響。復制實驗大鼠股動脈內膜損傷模型，將轉染人VEGF165基因的EPCs移植入大鼠體內，觀察基因修飾EPcs

2、歸巢至損傷內膜及損傷血管段內皮結構變化，評價損傷血管段局部再內皮化過程中基因修飾對EPCs的功能影響。將基因治療和干細胞治療方法聯(lián)合應用在血管損傷的內皮修復治療，探討基因修飾EPCs對損傷血管的再內皮化、重建血管生物學功能、治療內膜損傷性血管性疾病的作用。方法：1構建攜帶人VEGFl65基因的真核表達質粒：擴增、提取質粒pGEMhVEGFl65中hVEGFl65目的基因，插入pcDNA3質粒載體，構建含有hVEGFl65基因的真核表達質

3、粒載體，酶切、測序鑒定。2EPcs的分離純化、培養(yǎng)、鑒定：采用密度梯度離心法從大鼠骨髓分離EPcs，原代培養(yǎng)后，透射電鏡觀察內皮祖細胞內部超微結構，熒光倒置顯微鏡鑒定DiI—AcLDL與FITc—uEA—I染色雙陽性細胞為正在分化的EPcs。3對EPCs進行vEGF基因轉染、擴增，改良Boyden小室分析基因修飾EPCs的粘附、遷移能力，ELISA方法分析EPCs中VEGF水平、MTT法分析細胞的增殖活性。4復制血管內膜損傷動物模型，將

4、基因修飾EPCs移植到實驗大鼠體內，觀察轉基因EPcs歸巢、向內皮細胞分化情況，分析基因修飾EPCs對損傷血管段局部再內皮化的影響。結果：1重組質粒通過酶切和測序鑒定證實了hvEGFl65定向插入到真核表達載體中。pcDNA3hVEGFl65可用于真核細胞的轉染。2EPCs的分離純化、培養(yǎng)、鑒定：密度梯度離心法分離的實驗大鼠骨髓單個核細胞。培養(yǎng)3天后，鏡下可見有細胞貼壁，培養(yǎng)至7天貼壁細胞逐漸增多，并呈現鋪路石樣。用DiI—acLDL及