雙重因素sC5b-9和HBx對裂孔膜蛋白在足細胞表達的影響.pdf

1、目的：腎小球足細胞是一種高度分化的終末細胞,相鄰兩足突之間相互連接形成的裂孔隔膜構(gòu)成了腎小球最后一道濾過屏障。對乙型肝炎病毒相關(guān)性膜性腎病(HBV-MN)的臨床病理研究顯示患者均存在不同程度的足突融合,提示HBV-MN發(fā)生過程中存在裂孔隔膜的異常。與原發(fā)性膜性腎病相比,HBV-MN不僅存在補體攻膜復(fù)合物對足細胞的損傷,還存在HBV蛋白對足細胞的作用,因此本研究通過構(gòu)建體外足細胞的亞溶量C5b-9(sC5b-9)模型,利用攜帶HBx基因的

2、復(fù)制缺陷型腺病毒轉(zhuǎn)染足細胞,觀察sC5b-9和HBx雙重損傷因素對培養(yǎng)足細胞裂孔膜蛋白表達和分布有何影響。
　　方法：通過檢測細胞培養(yǎng)上清液中的LDH活性,采用“棋盤實驗”的方法確定sC5b-9攻擊足細胞的抗體和補體濃度,瑞士-吉姆薩染色觀察sC5b-9對足細胞形態(tài)的影響,間接免疫熒光染色與激光共聚焦顯微鏡觀察足細胞裂孔膜蛋白分布的變化,western-blot檢測足細胞裂孔膜蛋白表達量的變化。
　　結(jié)果：通過LDH的測定確

3、定了sC5b-9模型的抗體濃度為1％,補體濃度為1%。細胞形態(tài)學(xué)觀察顯示sC5b-9可以造成足細胞突觸減少,胞質(zhì)輕微空泡變性,胞核腫脹呈顆粒樣改變,核膜界限模糊等變化。免疫熒光染色顯示sC5b-9和HBx雙重作用下裂孔隔膜蛋白分布異常較單因素更顯著:nephrin主要朝核周分布聚集,胞質(zhì)和突起的表達急劇減少;空白組podocin和CD2AP在胞質(zhì)均勻分布,膜周呈小顆粒狀,而雙重損傷組呈粗絲狀或者大顆粒樣分布于膜周和突起。westernb