GC-MS篩查尿中單糖及其在臨床診斷中的應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　 近年來，GC-MS常被應(yīng)用于代謝疾病的研究，并且取得了令人矚目的成果。代謝疾病是指體內(nèi)生物化學(xué)過程發(fā)生障礙時(shí)，某些代謝物質(zhì)如糖、脂肪、蛋白質(zhì)、嘌呤、鈣銅等堆積或缺乏而引起的疾病。糖尿病(Diabetes mellitus，DM)是一種常見的內(nèi)分泌代謝疾病，近年來有發(fā)病率逐年上升及年輕化的趨勢(shì)，全球目前有超過1.5億糖尿病患者，到2025年這一數(shù)字將增加一倍[1]。因此，對(duì)于糖尿病人群進(jìn)行有目的的篩查以便早期診斷和治

2、療具有非常重要的意義。本研究采用對(duì)尿液進(jìn)行硅烷化前處理的方法，建立了GC-MS檢測(cè)尿液中的單糖及其相關(guān)代謝物的方法，該實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確、靈敏度高、特異性強(qiáng)，避免了臨床上生化檢測(cè)中出現(xiàn)的假陰（陽(yáng)）性結(jié)果。并實(shí)現(xiàn)了一次檢測(cè)多種物質(zhì)，大大提高了遺傳代謝病的檢測(cè)效率，是篩查遺傳代謝病的有效手段。因此在臨床應(yīng)用方面將會(huì)有很高的應(yīng)用價(jià)值和推廣前景。
　　 方法:
　　 取0.1ml尿液于試管中，加尿素酶20μl室溫放置隔夜處理，加入0.5m

3、l乙腈和5μl內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋震蕩1min，加飽和NaCl200μl，混勻，離心5min，取上層至氮?dú)庀麓蹈桑覰，O-雙（三甲基硅烷）三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化試劑10μ1微波衍生10min，冷卻至室溫后，氮?dú)獯禎饪s，加20μl正己烷，進(jìn)樣1μl供GC-MS分析。
　　 結(jié)果:
　　 利用硅烷化衍生試劑N，O-雙（三甲基硅烷）三氟乙酰胺(BSTFA)對(duì)單糖進(jìn)行處理，單糖葡萄糖五個(gè)羥基上的氫原子均被三甲基硅烷取代，取代

4、產(chǎn)物極性降低，可供GC-MS分析，其線性關(guān)系良好。同時(shí)尿液中的其他代謝物質(zhì)均被衍生化，我們對(duì)有機(jī)酸類物質(zhì)進(jìn)行半定量研究，結(jié)果表明其含量低于于正常人群，為臨床上早期診斷糖尿病及其它代謝疾病提供了可靠依據(jù)。
　　 討論:
　　 尿液作為檢測(cè)單糖的生物樣本有很多優(yōu)點(diǎn)，例如尿液是一種無創(chuàng)性生物樣品，避免了抽血給患者帶來的身體和精神上的創(chuàng)傷。尿液作為體內(nèi)排泄物，能反應(yīng)近期的生理情況。并且受外在環(huán)境影響小，易于獲得、儲(chǔ)存和運(yùn)輸，因此

5、常用于臨床普查。
　　 本方法檢測(cè)限高，可以檢查出來非常輕微的糖尿病，同時(shí)可以監(jiān)視糖尿病病人的治療狀態(tài)，可以預(yù)示糖尿病病人的合并癥，可以指導(dǎo)糖尿病的治療。
　　 在我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中，我們針對(duì)同一個(gè)生物樣品的衍生化時(shí)間及衍生化試劑用量進(jìn)行考察，結(jié)果顯示衍生時(shí)間與用量均在10min與10μ1時(shí)產(chǎn)物與內(nèi)標(biāo)峰面積比最大，適于樣品分析。
　　 對(duì)糖尿病患者的葡萄糖檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，除了葡萄糖的含量高于正常組外，其它代謝物也均被