FOXM1在初治急性髓系白血病中的表達(dá)特征及其在FLT3-ITD中的作用.pdf

1、【目的】
　　研究FOXM1基因在成人初治急性髓系白血病患者中的表達(dá)特征,并分析其與患者基本情況、基因突變、預(yù)后分級(jí)及生存時(shí)間的關(guān)系。初步探索FOXM1與酪氨酸激酶受體突變型FLT3-ITD的關(guān)系,及FOXM1在FLT3-ITD細(xì)胞系的作用。
　　【方法】
　　收取我院2010年至2012年120例住院初治急性髓系白血病患者骨髓標(biāo)本(骨髓液和骨髓活檢組織),分離單個(gè)核細(xì)胞后提取RNA行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)

2、檢測(cè)FOXM1mRNA表達(dá)、FLT3-ITD和NPM1突變,提取DNA后行PCR測(cè)序檢測(cè)CEBPA突變,提取總蛋白后行Westernblot和骨髓活檢組織免疫組化檢測(cè)FOXM1蛋白表達(dá)。采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法檢測(cè)FOXM1表達(dá)與患者一般特征(年齡、性別、AML分型、初診時(shí)白細(xì)胞水平)、基因突變(FLT3-ITD和NPM1突變)及患者預(yù)后分級(jí)的關(guān)系,并對(duì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素行多因素Logistic回歸分析。根據(jù)患者的FOXM1

3、表達(dá)和預(yù)后分級(jí)進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析,生存率比較采用log-rank檢驗(yàn),并進(jìn)行Cox回歸分析。
　　應(yīng)用FLT3-ITD抑制劑AC220、FOXM1抑制劑硫鏈絲菌素(TST)和FLT3配體(FL)分別作用MV4-11細(xì)胞(含F(xiàn)LT3-ITD突變)和THP1細(xì)胞(含野生型FLT3受體)12h、24h和48h后,采用熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)FOXM1mRNA(AC220作用MV4-11細(xì)胞后行Western

4、blot檢測(cè)FOXM1蛋白表達(dá)變化)及FOXM1下游靶分子CyclinB1和Cdc25BmRNA表達(dá)變化。分別用不同濃度AC220和TST作用MV4-11細(xì)胞和THP1細(xì)胞24h,流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。多組間均值比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用T檢驗(yàn)或者配對(duì)T檢驗(yàn)。藥物間協(xié)同作用檢驗(yàn)采用析因分析。
　　【結(jié)果】
　　FOXM1在初治急性髓系白血病中表達(dá)率較高(mRNA77.50％,蛋白73.02%),FOXM1的

5、表達(dá)與AML患者性別、FLT3-ITD突變和預(yù)后分級(jí)有關(guān)。不同預(yù)后組中FOXM1表達(dá)率有明顯差異(低危組則為56%,中危組77.3%,高危組100%)。生存分析發(fā)現(xiàn)FOXM1陽性患者生存率低于陰性患者,但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(可能與樣本量小有關(guān))。
　　AC220作用MV4-11細(xì)胞后FOXM1mRNA和蛋白及下游靶分子CyclinB1和Cdc25BmRNA表達(dá)隨時(shí)間變化明顯下調(diào),而作用THP1細(xì)胞無明顯變化。TST作用MV4-11和

6、THP1細(xì)胞后均明顯抑制FOXM1及下游靶分子CyclinB1和Cdc25BmRNA表達(dá)。FLT3配體(FL)作用MV4-11細(xì)胞和THP1細(xì)胞后FOXM1及下游靶分子CyclinB1和Cdc25BmRNA表達(dá)輕度上調(diào)。AC220作用MV4-11細(xì)胞24h后細(xì)胞凋亡明顯,但凋亡率不隨濃度增高而增大,對(duì)THP1細(xì)胞凋亡無明顯影響。TST作用MV4-11細(xì)胞和THP1細(xì)胞24h后凋亡率均隨著濃度增高而增大。AC220和TST對(duì)MV4-11細(xì)

7、胞促凋亡作用效果無明顯差異,且AC220和TST聯(lián)合應(yīng)用無協(xié)同效應(yīng)。
　　【結(jié)論】
　　FOXM1在急性髓系白血病患者中表達(dá)率較高,特別在FLT3-ITD突變及預(yù)后中高危組中表達(dá)率更高。歐洲白血病網(wǎng)的預(yù)后分級(jí)系統(tǒng)同樣適合國(guó)內(nèi)AML患者的預(yù)后評(píng)估,與患者的總生存率明顯相關(guān)。FOXM1是FLT3-ITD重要下游分子,抑制FLT3-ITD后FOXM1表達(dá)明顯下調(diào),激活FLT3配體可使FOXM1表達(dá)輕度上調(diào)。抑制FLT3-ITD和抑