UCH-L3與LC3在急性髓系白血病中的表達(dá)及作用研究.pdf

1、目的:急性髓系白血病(AML)是一種常見的血液惡性腫瘤，研究表明自噬與AML的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但具體機(jī)制尚未明了。越來越多的報道證明，自噬和泛素蛋白酶體系統(tǒng)(UPS)之間存在著活躍的聯(lián)系。我們前期的蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，使用雷帕霉素處理AML細(xì)胞后，AML細(xì)胞發(fā)生自噬性死亡，而去泛素化酶家族成員泛素羧基末端水解酶L3(Ubiquitin C-terminal Hydrolase L3，UCH-L3)在自噬性死亡過程中表達(dá)上調(diào)，為了探討U

2、CH-L3與自噬在AML發(fā)生發(fā)展過程中的作用和相互關(guān)系，本研究在前期工作基礎(chǔ)上，使用UCH-L3抑制劑TCID處理急性髓系白血病細(xì)胞HL-60，觀察自噬的標(biāo)志性基因LC3在基因和蛋白水平上的表達(dá)變化，并進(jìn)一步通過臨床AML患者的外周血樣本分析研究UCH-L3和LC3基因的表達(dá)情況，進(jìn)而為探討自噬與UPS在白血病中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)，最終為白血病的診斷及治療提供新的靶點(diǎn)和策略。
　　方法:1.UCH-L3抑制劑TCID100nmol

3、/L處理HL-60細(xì)胞，Real Time PCR法檢測UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細(xì)胞前后UCH-L3和LC3的mRNA表達(dá)變化。2.Western Blot方法檢測UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細(xì)胞前后 UCH-L3和LC3蛋白水平的變化。3.Real Time PCR方法檢測健康組、AML初發(fā)組、AML緩解組及AML難治組外周血單個核細(xì)胞UCH-L3和LC3 mRNA的表達(dá)情況。4.追蹤同一患者治療前后UCH

4、-L3及LC3 mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.利用Real Time PCR及Western Blot方法，檢測經(jīng)UCH-L3抑制劑TCID處理HL-60細(xì)胞后UCH-L3和LC3在基因和蛋白水平上表達(dá)均下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　2.AML初發(fā)患者UCH-L3 mRNA的表達(dá)明顯低于健康人，而緩解、難治患者與健康人差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但初發(fā)、難治患者UCH-L3 mRNA表達(dá)明顯低于緩解的，差異有統(tǒng)計(jì)

5、學(xué)意義(p＜0.05)。
　　3.AML初發(fā)患者自噬基因LC3 mRNA表達(dá)明顯高于健康人，而緩解、難治患者與健康人差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但緩解、難治患者LC3 mRNA表達(dá)明顯低于初發(fā)的，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　4.同一患者治療前后比較，UCH-L3mRNA的表達(dá)量治療后較治療前上調(diào)，同時LC3 mRNA的表達(dá)量治療后較治療前下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　結(jié)論:1.抑制UCH-L3活性后，