慢性腎衰大鼠鹽敏感性的中樞RAS調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　 高血壓是腎實(shí)質(zhì)疾病最常見的繼發(fā)疾病。容量負(fù)荷/鈉潴留和腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的不適當(dāng)?shù)募せ钍悄I病患者發(fā)生高血壓的主要決定因素。最近的研究顯示，中樞交感神經(jīng)系統(tǒng)(sympathetic nervous system，SNS)活動(dòng)的增加參與了慢性腎功能衰竭(CRF)高血壓的發(fā)生。
　　 1CRF時(shí)高血壓的發(fā)病機(jī)理
　　 壓力性利尿是體液容量和動(dòng)脈壓長(zhǎng)期控制的反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)的主要部分。容量擴(kuò)張引

2、起血壓升高的準(zhǔn)確機(jī)制尚不十分清楚，高血壓發(fā)生機(jī)制的自動(dòng)調(diào)節(jié)理論（autoregulation theory）可以解釋部分CRF患者容量擴(kuò)張與血壓升高的關(guān)系:容量擴(kuò)張→細(xì)胞外液容量和血容量的增加→靜脈回心血量增加→心輸出量增加→外周組織過(guò)度灌注→自動(dòng)調(diào)節(jié)血管收縮→總外周阻力增加→血壓升高。
　　 血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)通過(guò)多種機(jī)制升高血壓，包括血管收縮、鈉潴留、血管重塑和增加交感神經(jīng)活動(dòng);AngⅡ的1型

3、受體(AngiotensinⅡAT1-receptor，AT1R)拮抗劑特異性的阻斷AngⅡ與AT1R的結(jié)合，導(dǎo)致血管舒張、鈉排泄和血壓降低。RAS系統(tǒng)的所有成分在腦組織中均有表達(dá);研究表明，腦內(nèi)局部的RAS系統(tǒng)功能的異常與高血壓的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 腎臟與交感神經(jīng)的中樞核團(tuán)具有直接和間接的聯(lián)系，從而調(diào)節(jié)動(dòng)脈壓。直接的途徑是通過(guò)腎神經(jīng)，而間接的途徑是體液和體液相關(guān)的RAAS的激活，并作用于腦內(nèi)缺乏血腦屏障的RAAS作用部位。這

4、些區(qū)域在調(diào)節(jié)血壓和體液平衡方面具有重要作用。前腦室旁器官(circumventricular organs， CVOs)神經(jīng)核團(tuán)通過(guò)神經(jīng)突出到達(dá)下丘腦核團(tuán);下丘腦室旁核(Paraventricular hypothalamicnecleus，PVN)在整合腎臟傳入交感神經(jīng)反應(yīng)方面起著重要作用，其不但可以直接通過(guò)PVN的前交感神經(jīng)元調(diào)節(jié)腎臟傳入交感神經(jīng)活動(dòng)，還具有神經(jīng)激素的影響，可增加精氨酸加壓素和催產(chǎn)素向全身循環(huán)的釋放。
　　

5、2.高血壓的中樞機(jī)制
　　 越來(lái)越多的研究認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)控制血壓調(diào)節(jié)的功能紊亂導(dǎo)致交感神經(jīng)活動(dòng)的持續(xù)增加，進(jìn)而引起慢性高血壓。研究從腦內(nèi)傳出的交感神經(jīng)調(diào)節(jié)因素是認(rèn)識(shí)神經(jīng)源性高血壓發(fā)生機(jī)制的主要靶點(diǎn)。
　　 腦內(nèi)控制血壓調(diào)節(jié)的中樞絕大部分位于前腦的下丘腦和腦干的髓質(zhì)。這些核團(tuán)是高度網(wǎng)絡(luò)化的，其在心血管控制中的主要作用是通過(guò)調(diào)節(jié)交感神經(jīng)來(lái)調(diào)節(jié)血壓張力。此外，這些中樞心血管通路通過(guò)介導(dǎo)神經(jīng)激素分泌，包括精氨酸加壓素刺激血管收

6、縮和調(diào)節(jié)腎臟壓力性利尿機(jī)制。下丘腦控制中心通過(guò)刺激口渴和鹽欲對(duì)電解質(zhì)和血液容量也有重要的調(diào)節(jié)作用。
　　 高血壓動(dòng)物模型對(duì)于研究心血管調(diào)節(jié)核團(tuán)對(duì)神經(jīng)源性高血壓發(fā)生的具體作用至關(guān)重要。和這種調(diào)節(jié)紊亂有關(guān)的主要核團(tuán)包括:穹窿下器(SFO)，下丘腦室旁核(PVN)、腦干的延髓頭端腹外側(cè)核(RVLM)和孤束核(NTS)。PVN在正常血壓和高血壓狀態(tài)下對(duì)血壓調(diào)節(jié)都起著樞紐角色。這個(gè)核團(tuán)接受來(lái)自SFO和NTS等區(qū)域的關(guān)于心血管狀態(tài)的輸入信號(hào)

7、，整合輸入信號(hào)后，通過(guò)直接到達(dá)脊髓的中間外側(cè)細(xì)胞柱(IML)和其他的交感神經(jīng)調(diào)節(jié)區(qū)域包括RVLM的神經(jīng)突觸控制交感神經(jīng)的輸出信號(hào)。PVN也調(diào)節(jié)影響心血管功能的激素的產(chǎn)生，包括糖皮質(zhì)激素和垂體加壓素。
　　 3腦內(nèi)RAS系統(tǒng)與血壓
　　 對(duì)腦內(nèi)ANGⅡ和AT1R免疫活性的分布進(jìn)行比較顯示，絕大多數(shù)的腦內(nèi)ANGⅡ和幾乎所有的腦內(nèi)AT1R位于血腦屏障內(nèi)神經(jīng)核團(tuán)，在這些部位，腦內(nèi)內(nèi)源性的ANGⅡ能夠接觸AT1R，而循環(huán)中的ANG

8、Ⅱ無(wú)法到達(dá)此部位。但是在前腦存在一條AT1R的分布帶，使室周器官(SFO、OVLT)和血腦屏障內(nèi)的結(jié)構(gòu)(PVN)聯(lián)系起來(lái)。這條通路在解剖學(xué)上構(gòu)成了循環(huán)（外周）和腦（中樞）ANGⅡ系統(tǒng)之間的生理學(xué)的聯(lián)系。
　　 ANGⅡ是RAS系統(tǒng)合成的增壓激素，ANGⅡ的增壓作用通過(guò)作用于AT1受體(AT1R)表達(dá);ANGⅡ也可作為神經(jīng)肽，通過(guò)AT1R增加下丘腦和腦干心血管調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)元的興奮性，中樞神經(jīng)系統(tǒng)ANGⅡ/AT1R作用的過(guò)度活躍導(dǎo)致

9、神經(jīng)源性高血壓。
　　 4飲食鹽與高血壓
　　 大量的研究表明，隨著年齡的增長(zhǎng)，大量的飲食鹽攝入是原發(fā)性高血壓高發(fā)病率的唯一的最重要的可控性因素。腎臟對(duì)鈉和水的潴留是鹽誘導(dǎo)的高血壓最主要的發(fā)生機(jī)制。在血容量正常的高血壓患者，其血[Na+]水平往往輕度升高（約升高1～3mmol）。然而，鹽敏感的個(gè)體高鹽飲食并不僅僅升高血漿的[Na+]，其腦脊液的[Na+]也同時(shí)升高。
　　 腦內(nèi)感受性室周器官（包括SFO、OVLT

10、和MnPO）能夠通過(guò)鈉/滲透性受體監(jiān)控血漿和腦脊液中的[Na+]變化，而SFO是對(duì)滲透性刺激最重要的感受器。對(duì)SFO進(jìn)行定位損毀，能夠消除向腦室內(nèi)注射高滲鹽水(NaCl)引起的增壓反應(yīng)。電刺激研究證實(shí)，SFO神經(jīng)元投射至下丘腦室旁核，并且向PVN傳遞興奮性信號(hào)，而PVN進(jìn)一步將信號(hào)投射至脊髓中間外側(cè)細(xì)胞柱的交感神經(jīng)元。電損毀PVN部位能夠阻斷SFO介導(dǎo)的增壓反應(yīng)。有證據(jù)表明，AngⅡ是從SFO到PVN的神經(jīng)遞質(zhì)。
　　 位于前腦

11、的穹窿下器(SFO)缺乏完整的血腦屏障，因此能夠感受外周或腦脊液中鈉離子濃度和滲透壓的微小改變。下丘腦室旁核(PVN)位于第三腦室側(cè)面，是腦內(nèi)調(diào)節(jié)體液平衡的最重要的核團(tuán);其在解剖學(xué)和功能學(xué)上與SFO的神經(jīng)元聯(lián)系密切。PVN含有大量的合成精氨酸加壓素(AVP)的大細(xì)胞性神經(jīng)元，以及少量的小細(xì)胞性神經(jīng)元，其小細(xì)胞性神經(jīng)元投射至脊髓的交感神經(jīng)節(jié)前神經(jīng)元和腦干的運(yùn)動(dòng)前交感神經(jīng)元。因此，PVN是心血管系統(tǒng)和腎臟對(duì)鈉離子濃度和滲透壓改變產(chǎn)生反應(yīng)的神

12、經(jīng)源性和激素性調(diào)控的中樞。阻斷PVN部位的AT1R能夠減弱頸內(nèi)動(dòng)脈注射高滲鹽水引起的腎臟交感神經(jīng)的興奮。
　　 綜上所述，鑒于中樞神經(jīng)系統(tǒng)在血壓調(diào)控和高血壓發(fā)生、發(fā)展中的重要地位和作用，研究慢性腎功能衰竭狀態(tài)下中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是腦部RAS系統(tǒng)是否發(fā)生異常改變，將進(jìn)一步加深對(duì)慢性腎功能衰竭及其他慢性腎臟病高血壓的發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)。
　　 本研究將對(duì)比5/6Nx大鼠和假手術(shù)大鼠（sham大鼠）腦內(nèi)心血管調(diào)控中樞的關(guān)鍵神經(jīng)核團(tuán)

13、（SFO和PVN）RAS系統(tǒng)的活化水平;并觀察5/6Nx和sham大鼠腦內(nèi)RAS對(duì)不同濃度飲食鹽的反應(yīng)情況，以及伴隨的外周效應(yīng)（血壓，腎臟損傷程度等）;在上述研究基礎(chǔ)上，進(jìn)行高鹽飲食情況下大鼠腦內(nèi)RAS或交感神經(jīng)阻斷實(shí)驗(yàn)，觀察5/6Nx腦內(nèi)RAS是否參與其血壓的調(diào)節(jié)，探索5/6Nx大鼠腦內(nèi)RAS與其增強(qiáng)的交感神經(jīng)活動(dòng)之間的關(guān)系，并闡述其腦內(nèi)RAS與交感神經(jīng)相互關(guān)系的具體機(jī)制。
　　 材料和方法:
　　 動(dòng)物模型的制備

14、r>　　 雄性Sprague Dawley大鼠（購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）體重150-180g，行5/6腎切除術(shù)。于第10周對(duì)大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組。
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和標(biāo)本采集
　　 1.血壓和尿樣采集
　　 在分組后給予不同刺激前，采用股動(dòng)脈插管法測(cè)量麻醉狀態(tài)下大鼠股動(dòng)脈血壓，作為各組的基礎(chǔ)血壓;在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，再次測(cè)量大鼠的股動(dòng)脈血壓，以刺激14天血壓減去刺激前血壓的差值作為股動(dòng)脈血壓統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。不同刺激的最后三

15、天，代謝籠內(nèi)單只單籠飼養(yǎng)，連續(xù)三天收集24h尿液，用于24h尿鈉和尿蛋白定量。
　　 2.大鼠腦標(biāo)本摘取和采血
　　 刺激結(jié)束后，大鼠3％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(35m g/kg)后部分大鼠摘取新鮮腦核團(tuán)，用于western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SFO/PVN核團(tuán)RAS及TH的表達(dá)，另一部分大鼠制作腦石蠟切片，用于免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)SFO/PVN核團(tuán)RAS的表達(dá)和c-fos的表達(dá)。采血用于腎功能、電解質(zhì)、血AngⅡ及NE檢

16、測(cè)。
　　 第二章5/6Nx大鼠腦核團(tuán)(SFO/PVN部位)RAS的表達(dá)及對(duì)飲食鹽的反應(yīng)研究
　　 刺激14天后，對(duì)大鼠血壓及血、尿生理生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。采用免疫組化及western blot技術(shù)對(duì)腦核團(tuán)SFO/PVN部位RAS成分(AngⅡ和AT1R)表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　 第三章5/6Nx大鼠腦核團(tuán)(SFO/PVN部位)RAS的細(xì)胞定位及與神經(jīng)元活化的關(guān)系研究
　　 采用第二章5/6Nx大鼠的腦石蠟切片

17、，對(duì)腦RAS與神經(jīng)元標(biāo)志物或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行免疫熒光雙染，確定5/6Nx大鼠的腦RAS細(xì)胞定位。
　　 采用第二章5/6Nx大鼠的腦石蠟切片，進(jìn)行c-fos的免疫組化染色，觀察神經(jīng)元活化情況。
　　 第四章5/6Nx大鼠腦核團(tuán)(SFO/PVN部位)RAS活化與血壓及交感神經(jīng)的關(guān)系研究
　　 5/6Nx術(shù)后第10周對(duì)大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，所有大鼠在高鹽飼料刺激的同時(shí)，按如下分組進(jìn)行阻斷干預(yù)14天，具體分組如下（每

18、組n=12只）:
　　 ①Losartan0mg IG組:純水灌胃，體積0.5ml/kg/d
　　 ②Losartan1mg IG組:losartan灌胃劑量1mg/kg/d，體積0.5ml/kg/d
　　 ③Losartan50mg IG組:losartan灌胃劑量50mg/kg/d，體積0.5ml/kg/d
　　 ④Losartan500mg IG組:losartan灌胃劑量500mg/kg/d，體積

19、0.5ml/kg/d
　　 ⑤Losartan0mg ICV組:人工腦脊液(aCSF)側(cè)腦室注射，速度0.5μl/h
　　 ⑥Losartan1mg ICV組:losartan側(cè)腦室注射，劑量1mg/kg/d，速度0.5μl/h
　　 ⑦Clonidine5.76μg ICV組:clonidine側(cè)腦室注射，劑量5.76μg/kg/d，速度0.5μl/h
　　 ⑧Renal denervation組:行腎

20、神經(jīng)切斷術(shù)，純水灌胃，體積0.5ml/kg/d
　　 ⑨Tempol30mg/kg/d IG組:tempol灌胃劑量30mg/kg/d，體積0.5ml/kg/d
　　 注釋:灌胃組藥物均已純水作為溶劑，腦室內(nèi)注射組藥物以aCSF作為溶劑。I.G，灌胃給藥;I.C.V，腦室內(nèi)注射;aCSF，人共腦脊液。
　　 刺激14天后，對(duì)大鼠血壓及血、尿生理生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。采用免疫組化及western blot技術(shù)對(duì)腦核團(tuán)S

21、FO/PVN部位RAS成分（AngⅡ和AT1R）和TH表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并用免疫組化技術(shù)檢測(cè)c-fos的表達(dá)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:
　　 數(shù)據(jù)以mean±SE表示，所有統(tǒng)計(jì)由統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0完成。假手術(shù)和腎衰組實(shí)驗(yàn)前基礎(chǔ)數(shù)據(jù)比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn);刺激14天后，相同飲食鹽的假手術(shù)和腎衰組之間的比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn);假手術(shù)或腎衰組在不同飲食鹽刺激14天后的組內(nèi)比較，符合方差齊性檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)，采用one-way ANOV

22、A，當(dāng)P＜0.05時(shí)，用Post Hoc Tests的LSD法進(jìn)行兩兩比較;方差不齊時(shí)采用Welch檢驗(yàn);當(dāng)P＜0.05時(shí)，兩兩比較采用Dunnett'T3法。阻斷劑干預(yù)組之間比較采用one-wayANOVA，方法同前。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意。
　　 1.造模術(shù)后10周大鼠血壓及腎功能
　　 在術(shù)后第十周進(jìn)行不同飲食鹽刺激前，5/6Nx大鼠血壓已顯著高于sham組(P＜0.05)，5/6Nx組血肌酐和24小時(shí)尿蛋白

23、排泄量也顯著升高(P＜0.05)，證明5/6Nx大鼠造模成功。
　　 2.不同濃度飲食鹽刺激14天大鼠的生理及血、尿生化指標(biāo)
　　 在正常鹽情況下，5/6Nx大鼠血壓水平已顯著高于假手術(shù)大鼠(P＜0.05)。高鹽飲食能夠顯著升高5/6Nx大鼠的血壓、血NE水平、血鈉和24h尿蛋白(P＜0.05)，而低鹽飲食則能顯著降低5/6Nx大鼠的血壓(P＜0.05)。飲食鹽的改變對(duì)sham大鼠血壓、血鈉水平及24h尿蛋白無(wú)影響。

24、r>　　 Sham和5/6Nx大鼠24h尿量和24h尿鈉排泄量隨著飲食鹽的增加而增加(P＜0.05)，而血AngⅡ和NE隨著飲食鹽的增加而受到抑制(P＜0.05)
　　 3.不同濃度飲食鹽刺激14天大鼠股動(dòng)脈血壓的改變
　　 經(jīng)過(guò)14天不同的飲食鹽刺激，假手術(shù)大鼠血壓無(wú)明顯改變。與5/6Nx正常鹽組比較，高鹽飲食顯著升高5/6Nx大鼠血壓(P＜0.05)，而低鹽飲食則能降低5/6Nx大鼠血壓(P＜0.05)。
　

25、　 4.免疫組化檢測(cè)不同濃度飲食鹽刺激14天大鼠腦SFO/PVN核團(tuán)AngⅡ的表達(dá)
　　 相同飲食鹽時(shí)，5/6Nx大鼠SFO核團(tuán)和PVN核團(tuán)AngⅡ的表達(dá)均高于假手術(shù)大鼠(P＜0.05);高鹽飲食進(jìn)一步增強(qiáng)了5/6Nx大鼠AngⅡ在SFO和PVN的表達(dá)(P＜0.05)，而對(duì)sham大鼠AngⅡ表達(dá)無(wú)影響。與正常鹽組比較，低鹽飲食能夠降低sham和5/6Nx大鼠的AngⅡ的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 5.免疫組化和we

26、stern blot檢測(cè)不同濃度飲食鹽刺激14天大鼠腦SFO/PVN核團(tuán)AT1R的表達(dá)
　　 相同鹽飲食時(shí)，5/6Nx大鼠SFO和PVN核團(tuán)AT1R的表達(dá)高于假手術(shù)大鼠(P＜0.05);高鹽飲食進(jìn)一步增強(qiáng)了5/6Nx大鼠AT1R在SFO和PVN的表達(dá)(P＜0.05)，而對(duì)sham大鼠AT1R表達(dá)無(wú)影響。與正常鹽組比較，低鹽飲食能夠降低sham和5/6Nx大鼠的AT1R的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 6.5/6Nx大鼠SF

27、O/PVN核團(tuán)AngⅡ和AT1R的細(xì)胞定位研究
　　 免疫熒光雙染顯示，在SFO和PVN核團(tuán)，AngⅡ和AT1R均定為在神經(jīng)元細(xì)胞上，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞未見表達(dá)AngⅡ和AT1R。
　　 7.不同飲食鹽刺激5/6Nx大鼠腦SFO和PVN核團(tuán)神經(jīng)元的活化
　　 相同鹽飲食時(shí)，5/6Nx大鼠SFO和PVN核團(tuán)c-fos的表達(dá)高于假手術(shù)大鼠(P＜0.05);高鹽飲食進(jìn)一步增強(qiáng)了5/6Nx大鼠AT1R在SFO和PVN的表達(dá)(P

28、＜0.05)，而對(duì)sham大鼠c-fos表達(dá)無(wú)影響。與正常鹽組比較，低鹽飲食能夠降低sham和5/6Nx大鼠的c-fos的表達(dá)(P＜0.05)。
　　 8不同阻斷處理14天對(duì)高鹽飲食的5/6Nx大鼠生理指標(biāo)的影響
　　 14天的不同阻斷處理對(duì)大鼠的體重、血肌酐和血AngⅡ濃度無(wú)影響。與0mglosartan灌胃組比較，腦室內(nèi)注射losartan(1mg)能夠顯著降低血壓(P＜0.05)，降低血鈉水平(P＜0.05)，極顯

29、著的抑制血漿NE水平(P＜0.01)，并增加24h尿量和24h尿鈉排出量(P＜0.05)，而24h尿蛋白排出量顯著降低(P＜0.05)，且對(duì)循環(huán)RAS系統(tǒng)無(wú)影響，而相同劑量的losartan通過(guò)灌胃給藥則對(duì)上述指標(biāo)無(wú)任何影響，證明腦室內(nèi)注射losartan(1mg)是通過(guò)作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生降壓作用;因循環(huán)RAS系統(tǒng)未受影響，其對(duì)血NE水平的抑制和尿量、尿鈉排泄量的增加則反映了對(duì)腎臟交感神經(jīng)的抑制;腦室內(nèi)注射交感神經(jīng)抑制劑clonid

30、ine或進(jìn)行腎神經(jīng)切斷術(shù)產(chǎn)生與losartan腦室內(nèi)注射類似的抑制效果(P＜0.05);50mg losartan灌胃已能夠降低血壓、血鈉、血漿NE水平以及尿蛋白排泄量(P＜0.05)，并增加24h尿量和24h尿鈉排出量(P＜0.05)，并隨著劑量的增加（500mg losartan灌胃）而增強(qiáng)(P＜0.05);抗氧化劑tempol灌胃對(duì)高鹽飼養(yǎng)的5/6Nx大鼠的血壓、血鈉、血漿NE水平以及尿蛋白排泄量均有抑制作用(P＜0.05)，并能

31、夠增加24h尿量和24h尿鈉排出量(P＜0.05)，提示氧化應(yīng)激機(jī)制參與了高鹽飼養(yǎng)的5/6Nx大鼠高血壓的發(fā)生，并于交感神經(jīng)有關(guān)。
　　 9不同阻斷處理14天對(duì)高鹽飲食的5/6Nx大鼠股動(dòng)脈血壓的改變與0mg losartan灌胃組比較，腦室內(nèi)注射losartan(1mg)能夠顯著降低血壓(P＜0.05)，而相同劑量的losartan灌胃對(duì)血壓無(wú)影響，隨著losartan灌胃劑量的增加，50mg時(shí)血壓已顯著降低(P＜0.05)，

32、500mg則進(jìn)一步增強(qiáng)降壓幅度(P＜0.05)，達(dá)到與losartan(1mg) ICV相似的效果;腦室內(nèi)注射clonidine、腎神經(jīng)切斷術(shù)和外周給予tempol均能夠使血壓顯著降低(P＜0.05)。
　　 10不同阻斷處理14天對(duì)高鹽飲食的5/6Nx大鼠SFO/PVN核團(tuán)RAS表達(dá)的影響
　　 免疫組化檢測(cè)顯示，與0mg losartan灌胃組比較，腦室內(nèi)注射losartan(1mg)增強(qiáng)了SFO/PVN核團(tuán)AngⅡ

33、的表達(dá)(P＜0.05)，但顯著抑制了SFO/PVN核團(tuán)AT1R的表達(dá)(P＜0.05);而灌胃給予0～50mg的氯沙坦對(duì)AngⅡ和AT1R的表達(dá)均無(wú)影響，500mg氯沙坦灌胃上調(diào)了AngⅡ的表達(dá)(P＜0.05)和抑制AT1R的表達(dá)(P＜0.05)，灌胃給予抗氧化劑tempol亦未能影響腦內(nèi)AngⅡ和AT1R的表達(dá);交感神經(jīng)阻斷實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，切斷腎神經(jīng)能顯著降低SFO/PVN核團(tuán)AngⅡ和AT1R的表達(dá)(P＜0.05)，中樞給予交感神經(jīng)抑制劑c

34、lonidine無(wú)此效果，提示腎神經(jīng)傳入信號(hào)對(duì)腦內(nèi)AngⅡ表達(dá)具有刺激作用。
　　 Western blot檢測(cè)SFO/PVN核團(tuán)AT1R的表達(dá)進(jìn)一步印證了免疫組化的結(jié)果。
　　 11不同阻斷處理14天對(duì)高鹽飲食的5/6Nx大鼠SFO/PVN核團(tuán)TH表達(dá)的影響
　　 內(nèi)源性兒茶酚胺（去甲腎上腺素和腎上腺素）介導(dǎo)了交感神經(jīng)對(duì)血壓的調(diào)控，酪氨酸羥化酶(TH)是兒茶酚胺系統(tǒng)的限速酶，其表達(dá)水平反映了交感神經(jīng)的活動(dòng)狀態(tài)。

35、Western blot檢測(cè)顯示，與0mg losartan灌胃組比較，腦室內(nèi)注射losartan(1mg)顯著抑制了SFO/PVN核團(tuán)TH的表達(dá)(P＜0.05)，而相同劑量的losartan灌胃對(duì)TH表達(dá)無(wú)影響，表明腦內(nèi)TH的表達(dá)受到局部RAS系統(tǒng)的調(diào)控;大劑量losartan(500mg)灌胃也能抑制TH的表達(dá)(P＜0.05)，灌胃給予抗氧化劑tempol未影響腦內(nèi)TH的表達(dá);交感神經(jīng)阻斷實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，切斷腎神經(jīng)能顯著降低SF0/PVN

36、核團(tuán)TH的表達(dá)(P＜0.05)，中樞給予交感神經(jīng)抑制劑clonidine無(wú)此效果，提示5/6Nx大鼠腦內(nèi)TH的高度表達(dá)受到病態(tài)的腎臟傳入信號(hào)的影響。
　　 12不同阻斷處理14天對(duì)高鹽飲食的5/6Nx大鼠SFO/PVN核團(tuán)c-fos表達(dá)的影響
　　 c-fos作為神經(jīng)元活化的標(biāo)志，其大量表達(dá)提示神經(jīng)元受到短期或持續(xù)的刺激而處于活動(dòng)狀態(tài)。不同阻斷處理的5/6Nx大鼠SF0/PVN核團(tuán)c-fos表達(dá)情況見圖7和表8。與0mg

37、 losartan灌胃組比較，腦室內(nèi)注射losartan(1mg)顯著抑制了SFO/PVN核團(tuán)c-fos的表達(dá)(P＜0.05)，而相同劑量的losartan灌胃對(duì)c-fos表達(dá)無(wú)影響，表明losartan能夠抑制高鹽飲食的5/6Nx大鼠SFO/PVN核團(tuán)內(nèi)神經(jīng)元的活化;大劑量losartan(500mg)灌胃也能抑制c-fos的表達(dá)(P＜0.05)，灌胃給予抗氧化劑tempol未影響腦內(nèi)c-fos的表達(dá);交感神經(jīng)阻斷實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，切斷腎神經(jīng)

38、能顯著降低SFO/PVN核團(tuán)c-fos的表達(dá)(P＜0.05)，中樞給予交感神經(jīng)抑制劑clonidine無(wú)此效果，提示5/6Nx大鼠腎臟傳入信號(hào)激活了SFO/PVN核團(tuán)的神經(jīng)元。
　　 論文總結(jié):
　　 1.5/6Nx大鼠下丘腦心血管調(diào)控中樞（交感中樞）存在RAS的活化;
　　 2.5/6Nx大鼠腦內(nèi)活化的RAS系統(tǒng)通過(guò)刺激交感中樞引起血壓升高;
　　 3.高鹽飲食能夠加重5/6Nx大鼠腎損傷，并通過(guò)腎臟傳