開放ATP敏感性鉀通道對哮喘大鼠氣道重塑作用機制的研究.pdf

1、目的:建立哮喘大鼠氣道重塑模型,確定哮喘大鼠氣道平滑肌重塑,對哮喘大鼠給予ATP敏感性鉀通道開放劑—尼可地爾治療,并檢測相關(guān)指標。本研究主要探討開放ATP敏感性鉀通道導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)哮喘大鼠的氣道平滑肌重塑的分子機制,從而為治療哮喘提供新的途徑。
　　方法:(1)32只清潔級的雄性SD大鼠,隨機分為4組,分別為正常組(A組)、哮喘組(B組)、地塞米松治療組(C組)和尼可地爾治療組(D組)。本實驗動物模型采用5點注射致敏和霧化吸入卵白蛋白(

2、OVA)激發(fā)的方法建立哮喘大鼠模型。通過大鼠外周血中性粒細胞計數(shù),肺泡灌洗液中白細胞分類計數(shù),以及肺組織 HE染色確定大鼠哮喘模型制備成功。(2)將各組大鼠處死后取外周血,氣管,以及肺組織分別進行白細胞計數(shù),氣道張力檢測,HE染色檢測開放ATP敏感性鉀通道后,對哮喘大鼠氣道重塑的治療作用。(3)取各組大鼠肺組織,TRIzol法提取RNA并通過半定量PCR檢測TLR-4以及Bax/Bcl-2的RNA表達水平;Western Blot檢測N

3、F-κBp65、T-bet/GATA-3以及Bax/Bcl-2蛋白表達。
　　結(jié)果:(1)外周血白細胞計數(shù)和肺泡灌洗液白細胞計數(shù)的結(jié)果顯示,哮喘組大鼠嗜酸性粒細胞明顯增多;肺組織HE染色結(jié)果顯示哮喘組大鼠的支氣管氣道平滑肌厚度明顯增加、支氣管粘膜皺襞增多、管腔內(nèi)出現(xiàn)大量的嗜酸性粒細胞浸潤、肺泡隔增厚。表明氣道重塑哮喘大鼠模型建立成功。(2)尼可地爾治療組和地塞米松治療組中,與哮喘組比較,外周血和肺泡灌洗液的嗜酸性粒細胞數(shù)顯著降低,

4、有顯著性差異;氣管螺旋條對氯化乙酰膽堿的收縮反應(yīng)明顯降低;氣道平滑肌厚度明顯減小,粘膜的結(jié)構(gòu)較為完整,嗜酸性粒細胞浸潤減少,并無明顯的氣道重塑表現(xiàn)。(3)RT-PCR的結(jié)果顯示,尼可地爾治療組與哮喘組比較,TLR-4的RNA水平明顯降低,與凋亡相關(guān)的基因Bax表達增加,而Bcl-2表達降低;Western Blot結(jié)果表明炎性相關(guān)因子NF-κBp65的表達降低,免疫相關(guān)因子T-bet含量升高而GATA-3明顯下降,凋亡相關(guān)的基因 Bax