線粒體ATP敏感性鉀通道在腺苷抗心肌細胞肥大中的作用.pdf

1、【目的】 許多研究證實外源性腺苷有抗心肌肥大作用，且近年來發(fā)現(xiàn)線粒體ATP敏感性鉀通道( Mitochondrial K<,ATP> channels，Mito K<,ATP> channel)具有抗心肌肥大作用，但兩者之間的關(guān)系目前仍不清楚。本研究以血管緊張素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)誘導(dǎo)的培養(yǎng)心肌細胞肥大模型為研究對象，給予外源性類腺苷作用，通過觀察β-MHC變化，探討外源性腺苷是否可以抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)

2、的心肌細胞肥大作用；然后觀察線粒體ATP敏感性鉀通道抑制劑5-hydroxydecanoate(5-HD)及開放劑二氮嗪(DiazDxide，DZ)對腺苷(Adenosine，Ado)抗心肌肥大作用的影響，以探討線粒體ATP敏感性鉀通道是否參與腺苷抗心肌肥大作用。 【方法】 1．體外乳鼠心肌細胞的培養(yǎng)提取與培養(yǎng)：提取sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌細胞置于5％CO<,2>、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2．建

3、立血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)體外乳鼠心肌細胞肥大的模型：分別將48h的SD乳鼠心肌細胞用不同血管緊張素Ⅱ濃度處理，置5％CO<,2>、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，并檢測<'3>H-亮氨酸(<'3>H-Leu)摻入速率和MTT，以觀察不同濃度血管緊張素Ⅱ?qū)π募〖毎鞍缀铣伤俾屎图毎盍凹毎砻娣e的影響。 3．采用析因分析的方法，利用血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)體外乳鼠心肌細胞肥大的模型，予腺苷A<,1>受體激動劑CCPA和線粒體ATP敏感性鉀通道阻滯劑

4、5-HD、開放劑二氮嗪預(yù)處理，并通過MTT法檢測各實驗組細胞活力，和RT-PCR檢測β-MHC mRNA的表達水平，及Western Blotting檢測β-MHC蛋白的表達水平，以研究外源性腺苷抗心肌肥大的作用，及線粒體ATP敏感性鉀通道在其中的作用。 【結(jié)果】 1．不同Ang Ⅱ濃度下心肌細胞<'3>H-亮氨酸(<'3>H-Leu)摻入速率測定： Ang Ⅱ在10<'-8>～10<'-5>mol/L濃度范圍內(nèi)

5、，均促進心肌細胞<'3>H-亮氨酸摻入(P<0.01)，呈濃度依賴性，心肌細胞摻入速率在10<'-5>mol/L時最大。 2．噻唑藍比色法(MTT法)檢測不同Ang Ⅱ濃度下心肌細胞活力： 在10<'-8>～10<'-5>mol/L濃度范圍內(nèi)心肌細胞活力在不同Ang Ⅱ濃度刺激下均出現(xiàn)心肌細胞活力升高(p<0.01)，在10<'-7>mol/L時OD值最大，高于10<'-8>mol/L時OD(p<0．01)值和10<'-

6、6>mol/L時OD值(P>0.05)。 3．不同Ang Ⅱ濃度下心肌細胞表面積測定： 在10<'-8>～10<'-8>mol/L濃度范圍內(nèi)各組心肌細胞表面積均高于對照組(P<0.01)，并與濃度有關(guān)，在10<'-6>mol/L時表面積最大，與10<'-8>mol/L時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 4．利用噻唑藍比色法(MTT法)觀察不同CCPA濃度對血管緊張素Ⅱ致心肌細胞肥大的作用的影響： 在

7、10<'-8>～10<'-6>mol/L濃度范圍內(nèi)CCPA具有對抗Ang Ⅱ致心肌細胞肥大的作用(P<0.01)，對Ang Ⅱ的致心肌細胞肥大的影響與濃度有關(guān)，在10<'-6>mol/L時將Ang Ⅱ致心肌細胞肥大的效用降到最低，與10<'-7>mol/L時相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 5．檢測各實驗組心肌細胞活力、β-MHC的mRNA和蛋白表達觀察線粒體ATP敏感性鉀通道在腺苷抗心肌肥大中的作用： 在Ang

8、Ⅱ組，心肌細胞活力、β-MHC mRNA表達和蛋白水平均高于正常對照組(P<0.01)，在CCPA+Ang Ⅱ組心肌細胞活力、β-MHCmRNA表達和蛋白水平均明顯低于Ang Ⅱ組(P<0.01)，低于正常對照組(P<0.05)，在Ang Ⅱ+CCPA+5-HD組心肌細胞活力、β-MHCmRNA表達和蛋白水平高于CCPA+Ang Ⅱ組(P<0.01)，與對照組相比仍存在一定的差異，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而在AngⅡ+5-H

9、D組心肌細胞活力、β-MHC mRNA表達和蛋白水平高于對照組(P<0.01)，與Ang Ⅱ組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但在AngⅡ+DZ組心肌細胞活力、β-MHC mRNA表達和蛋白水平均低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 【結(jié)論】 1．血管緊張素Ⅱ有致心肌細胞肥大作用，呈濃度依賴性。 2．腺苷A<,1>受體激動劑CCPA具有拮抗Ang Ⅱ的致心肌細胞肥大的作用，其拮抗效應(yīng)呈濃度依賴性。