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文檔簡介
1、目的:構建人轉化生長因子β3(TGFβ3)、結締組織生長因子(CTGF)和基質金屬蛋白酶抑制劑(TIMP1)基因重組慢病毒多表達質粒。轉染293細胞后檢測活性、包裝病毒并探討其作用特點。
方法:應用全基因合成技術,以“自剪切多肽2A”串聯(lián)目的基因,并克隆到慢病毒表達質粒構建重組慢病毒質粒pLVX-TGFβ3-P2A-CTGF-T2A-TIMP1。轉染293細胞后,應用RT-PCR和Western-Blot技術分別檢測轉染后
2、不同時間點目的基因的mRNA和蛋白質表達水平。
結果:RT-PCR和Western-blot技術檢測結果顯示重組質粒成功表達了目的基因并于轉染后48小時左右達到峰值,“2A”結構下游基因蛋白質表達量約為上游基因的80%。經(jīng)慢病毒包裝后獲得5×108TU/ml滴度的活性病毒。
結論:成功構建了攜帶人TGFβ3、CTGF和TIMP1基因的慢病毒多表達質粒并收獲較高滴度的活性病毒,為轉染椎間盤髓核細胞和動物實驗打下
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