甲狀旁腺激素在尿毒癥中誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討尿毒癥毒素甲狀旁腺激素(Parathyroid hormone，PTH)是否誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞是否發(fā)生內(nèi)皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Endothelial-mesenchymal transition，EndMT)及其中的分子機(jī)制。
　　方法:采用人主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)培養(yǎng)至對數(shù)生長期，分別加入不同劑量的全長重組PTH(10-12 mol/L、10-11 mol/L、10-10 mol/L、10-9 mol/L、10-8

2、mol/L)作用48h;或在10-8 mol/L PTH作用下，選擇12h、24h、36h和60h共4個時間點(diǎn)，對HAEC細(xì)胞的形態(tài)變化進(jìn)行觀察，并采用熒光實(shí)時定量PCR和Western blot對HAEC細(xì)胞中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物VE-Cadherin和CD31、間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA的mRNA轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測。相關(guān)分子機(jī)制的探討主要采用Western blot對HAEC細(xì)胞中TGF-β1和ILK的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，并利用

3、TGF-β1信號通路抑制劑SB431542、Pirfenidone和ILK抑制劑Cpd22干預(yù)PTH誘導(dǎo)細(xì)胞，對HAEC細(xì)胞的形態(tài)變化進(jìn)行觀察，以及HAEC細(xì)胞發(fā)生EndMT的相關(guān)標(biāo)志物進(jìn)行實(shí)時定量PCR和Western blot檢測。
　　結(jié)果:細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果提示PTH可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞HAEC細(xì)胞在形態(tài)上發(fā)生纖維化轉(zhuǎn)變。實(shí)時定量PCR和Western blot結(jié)果都表明在PTH作用下，血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志分子VE-Cadher

4、in和CD31表達(dá)降低;纖維細(xì)胞標(biāo)志分子α-SMA的表達(dá)則顯著升高，且呈時間和劑量依賴性。Western blot分析進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)HAEC細(xì)胞中TGF-β1和ILK的表達(dá)水平在PTH誘導(dǎo)下同時呈時間和劑量依賴性的升高。使用信號通路抑制劑抑制TGF-β1和ILK可以部分逆轉(zhuǎn)PTH對HAEC細(xì)胞纖維化的誘導(dǎo)增加作用，包括逆轉(zhuǎn)PTH降低內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物和增加纖維化細(xì)胞標(biāo)志物的作用。
　　結(jié)論:PTH誘導(dǎo)可以減弱HAEC細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞特征、增