NF-кB在COPD肺血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)及其在香煙提取物誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、本文對(duì)NF-кB在COPD肺血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)及其在香煙提取物誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用進(jìn)行了研究，本研究分為三個(gè)部分：
　　 第一章：COPD患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和NF-κB的表達(dá)情況。
　　 目的：觀察慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、核因子κ B(NF-κ B)表達(dá)變化情況。
　　 方法：收集湘雅二醫(yī)院胸外科20

2、08年6月至2008年10月因肺癌、肺大皰入院行肺葉切除術(shù)的患者19例，根據(jù)COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)和WHO吸煙調(diào)查方法標(biāo)準(zhǔn)，將其分為三組：A組：非吸煙非COPD者(6例)；B組：吸煙非COPD者（6例）；C組：吸煙并COPD患者（穩(wěn)定期，7例）。利用HE染色評(píng)估肺部病理改變，采用缺口末端標(biāo)記法檢測(cè)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NF-κB p65蛋白在肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)。
　　 結(jié)果：A、B、C三組肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率依次

3、增高，分別為(4.84±0.45)％、(8.80±0.63)％、(11.87±0.79)％，任意兩組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。A組、B組、C組患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-KBp65表達(dá)率分別為(3.72±0.33)％、(15.92±1.13)％、(37.23±4.75)％，三組間依次增高，各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴吸煙并COPD患者及吸煙非COPD者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加。⑵吸煙并

4、COPD患者及吸煙非COPD患者肺血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB表達(dá)增加。⑶吸煙可能與肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，NF-κB表達(dá)增加有關(guān)。
　　 第二章：COPD小鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和NF-κB表達(dá)情況。
　　 目的：觀察COPD小鼠模型肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、核因子κB(NFκB)表達(dá)變化情況。
　　 方法：16只C57BL/6J雄性小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（8只）和COPD組（8只），采用煙霧暴露法建立COPD模型，對(duì)肺組織切片以H

5、E染色評(píng)估肺部病理改變，采用缺口末端標(biāo)記法定量肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NF-κ B蛋白在肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：COPD模型小鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率為(15.91±1.15)％，較對(duì)照組[(3.39±0.64)％]增高，兩組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。COPD模型小鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB p65表達(dá)率為(35.30±4.20)％，較對(duì)照組[(6.37±0.54)％]增高，兩組間

6、比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴吸煙COPD模型組小鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡增加。⑵吸煙COPD模型組小鼠肺血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB表達(dá)增加。
　　 第三章：NF-κB在CSE誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用。
　　 目的：研究NF-κB在香煙提取物(cigarette smoking extract，CSE)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC），分

7、為以下三組，分別給予不同處理：1.不同濃度的CSE（0％、2.5％、5％、10％、20％）干預(yù)HUVEC12h；2.5％CSE干預(yù)HUVEC各0h、0.5h、2h、4h、8h、12h；3.用100μmol/LNF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）預(yù)處理HUVEC0.5h后，以5％CSE干預(yù)該細(xì)胞各1h、2h。以上各組采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)NF-κBp65核轉(zhuǎn)位情況，用流式細(xì)胞術(shù)Annexin V/PI雙染法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率

8、。
　　 結(jié)果：⑴CSE濃度低于5％時(shí)，隨CSE濃度的增加，NF－κBp65核轉(zhuǎn)位率逐漸增加，5％CSE干預(yù)組核轉(zhuǎn)位率最高，為（18.13±1.37）％，當(dāng)CSE濃度超過(guò)5％時(shí)，NF-κBp65核轉(zhuǎn)位率逐漸下降，且與5％CSE干預(yù)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；隨CSE濃度的增加，HUVECs的凋亡率逐漸增加，10％CS組凋亡率最高，為(45.19±4.91)％，與其余干預(yù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。⑵5％CS

9、E干預(yù)HUVECO.5h時(shí)NF-κBp65核轉(zhuǎn)位率最高，為(93.80±3.12)％,和其他組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，隨干預(yù)時(shí)間增加，核轉(zhuǎn)位率迅速下降；5％CSE干預(yù)HUVEC2h以下，隨干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，HUVEC的凋亡率逐漸增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5％CSE干預(yù)HUVEC超過(guò)2h后，凋亡率明顯增加，且與2h組[(7.45±1.06)％]比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。⑶PDTC預(yù)處理細(xì)胞后，5％CSE誘導(dǎo)1h及2h后的NF-

10、κBp65核轉(zhuǎn)位率明顯下降，分別為(5.10±0.55)％、(4.51±0.85)％，與無(wú)預(yù)處理組[(31.93±2.94)％]、[(25.32±3.54)％]比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；以PDTC預(yù)處理HUVECs后，5％CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率明顯增高，1h與2h組凋亡率分別為(11.20±1.11)％、(38.83±3.43)％，與未預(yù)處理組[(6.53±0.80)％]、[(28.87±3.53)％]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P