黑加侖提取物保護血管內(nèi)皮細胞氧化損傷的實驗研究.pdf

1、目的：本研究采用過氧化氫(H2O2)體外誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vascular endothelial cells，ECV-304)損傷，建立ECV-304氧化損傷模型，觀察黑加侖提取物對損傷ECV-304的保護作用，并探討其機制。方法：1.體外ECV-304氧化損傷的建立：實驗分正常對照組，H2O2組(濃度分別為0.40mmol/L,2.00mmol/L，10.00mmol/L)，用H2O2分別作

2、用于培養(yǎng)24、48、72h后的ECV-304細胞損傷4h后，測定各組細胞四嘩鹽(MTT)指標，并觀察各組細胞形態(tài)變化。2.黑加侖提取物對體外ECV-304氧化損傷保護作用的研究： 實驗分①正常對照組： ②陰性對照組(二甲基亞砜)； ③H2O2模型組(H2O2濃度為2.00mmol/L)； ④受試物低、中、高濃度組在培養(yǎng)基中先加入終濃度為3.13μg/mL、12.50μg/mL和50.00μg/mL的黑加

3、侖提取物孵育24小時，再加入2.00mmol/L的H2O2誘導損傷 ⑤陽性對照組培養(yǎng)基中先加入終濃度為100.00μmol/L的維生素E孵育24小時，再加入2.00mmol/L的H2O2誘導損傷；收集細胞，測定各組細胞活力(OD值)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)以及乳酸脫氫酶(LDH)、內(nèi)皮素(ET)和前列環(huán)素(PGl2)的穩(wěn)定代謝物6-Keto-PGFla。3.黑加侖提取物拮抗H2O2誘導的ECV-304凋亡：實驗分組

4、和條件同2，誘導凋亡后收集細胞，流式細胞術Annexin V-FITC/PI雙染標記法測定細胞凋亡率。結果：1.體外ECV-304氧化損傷模型的建立： ①不同濃度H2O2損傷組與正常對照組細胞形態(tài)光鏡下差別顯著。隨著H2O2濃度的提高，損傷越重，形態(tài)學改變越明顯。 ②H2O2模型組與正常對照組細胞活力(OD值)均有差別，且有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，隨著H2O2濃度的升高，細胞活力(OD值)有降低的趨勢。2.黑加

5、侖提取物對體外ECV-304氧化損傷保護作用的研究：受試物3.13μg/mL～50.00μg/mL組大部分細胞仍保持多角形，細胞形態(tài)、結構基本清晰，部分細胞裂解為碎片狀、漂浮。陰性對照組細胞則無明顯改變，陽性對照組細胞呈多角形，排列有所紊亂。模型組NO、PGI2含量均低于正常對照組(P＜0.01)，MDA、ET含量及LDH活力均明顯高于正常對照組(P〈0.01)，除陰性對照組外(P＞0.05)，正常對照組，黑加侖提取物中、高劑量組，陽性

6、對照組分別與H2O2模型組比較，細胞活力(OD值)及NO、PGl2含量均顯著升高(P〈0.05或者P〈0.01)，MDA、ET含量及LDH活力顯著降低(P〈0.05或者P〈0.01)。3.黑加侖提取物拮抗。H2O2誘導的ECV-304凋亡：黑加侖提取物低、中、高劑量組，陽性對照組和正常對照組早期凋亡率和總凋亡率明顯低于H2O2模型組；黑加侖提取物組隨著濃度的增高，早期凋亡率和總凋亡率逐漸降低。結論：1、H2O2可誘導ECV-304

7、損傷，且隨其濃度不同，使ECV-304受損程度不同。H2O2作用時間4小時及濃度2.00mmol/L時為適合本實驗研究的最佳條件。2、黑加侖提取物各劑量都能提高內(nèi)皮細胞的活力，增加NO、PGI2含量，降低MDA、ET含量及LDH活力，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。從而可以認為黑加侖提取物對H2O2誘導的ECV-304損傷有明顯的保護作用。3、黑加侖提取物及維生素E可降低H2O2誘導的ECV-304凋亡的早期凋亡率和總凋亡率。4、黑加侖提