天然產(chǎn)物中EV713C蛋白酶抑制劑的研究.pdf

1、腸道病毒71型(EV71)屬于小核糖核酸病毒科腸道病毒屬，是感染手足口疾病(HFMD)的主要病原體，常引起無(wú)菌性腦膜炎、腦干腦炎和脊髓灰質(zhì)炎等多種與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病。自1969年起，HFMD一直危害著人類(lèi)的健康，它的流行已成為我國(guó)大陸、臺(tái)灣地區(qū)以及東南亞國(guó)家重大公共衛(wèi)生問(wèn)題，但到目前為止，由EV71引起的疾病尚無(wú)有效的治愈藥物。
　　 EV71的3C蛋白酶在病毒蛋白加工過(guò)程中，水解除了VP1和2A與VP2和VP4之外的其他所有

2、多聚蛋白;還切割許多調(diào)控因子，如TATA-box結(jié)合蛋白(TBP)、轉(zhuǎn)錄激活因子p53等;所以，EV713C蛋白酶有望作為蛋白靶點(diǎn)進(jìn)行藥物開(kāi)發(fā)。同時(shí)，具有結(jié)構(gòu)多樣性和生物活性多樣性的天然產(chǎn)物一直是新藥開(kāi)發(fā)的重要源泉。因此從天然產(chǎn)物庫(kù)中通過(guò)高通量方法篩選3C蛋白酶抑制劑是一種快捷、高效地發(fā)現(xiàn)抗EV71藥物的途徑。
　　 本文應(yīng)用常規(guī)的色譜柱層析、高效液相色譜(HPLC)、重結(jié)晶等技術(shù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)備的中草藥浸膏和中藥飲片進(jìn)行提取、分

3、離、純化，獲得標(biāo)準(zhǔn)組分（成分約為10～20種）或單體增補(bǔ)到天然產(chǎn)物庫(kù)中;然后基于3C蛋白酶的體外高通量酶活篩選體系，選出有活性的標(biāo)準(zhǔn)組分或備選藥材浸膏;對(duì)選出的苦參、虎杖、前胡、莪術(shù)、炒棗仁、丹皮6種備選藥材進(jìn)行活性跟蹤下的分離純化，共計(jì)發(fā)現(xiàn)7種有明顯抑制活性的標(biāo)準(zhǔn)組分和一個(gè)單體化合物。單體化合物降苦參酮的IC50為135.8μM。在提取分離過(guò)程中，共獲1045種標(biāo)準(zhǔn)組分，純化出30種單體化合物，通過(guò)核磁共振波普(NMR)、質(zhì)譜(MS)

4、等波譜方法鑒定其相應(yīng)的結(jié)構(gòu)，其中physicon-8-β-D-(6'-O-acetyl) Glucoside是從虎杖中首次分離，對(duì)羥基苯甲酸，對(duì)甲氧基苯甲酸是從苦參中首次分離。
　　 此外，對(duì)活性化合物降苦參酮在苦參乙酸乙酯層進(jìn)行了含量測(cè)定，其線(xiàn)性范圍為0.056μg～0.56μg(r=0.9992)，含量為3.29％，因降苦參酮在總黃酮中含量也只有4.07％～4.13％，這表明降苦參酮主要存在于苦參乙酸乙酯中，這為更快捷地從苦