CD38缺失對小鼠巨噬細胞TLR2介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響及機制研究.pdf

1、目的：CD38是一種以NAD+為底物，具有環(huán)化和水解作用的雙功能酶，可分別催化NAD+合成cADPR和水解NAD+或cADPR成ADPR。敲除小鼠CD38基因可導(dǎo)致組織中NAD+濃度顯著升高，Sirt1活性上升。本實驗室的前期工作顯示：CD38基因缺失可明顯加重高脂飲食誘導(dǎo)的ApoE基因敲除小鼠的動脈粥樣硬化損傷，并觀察到大量巨噬細胞在損傷區(qū)域的侵潤，提示巨噬細胞在動脈粥樣硬化中發(fā)揮重要作用。巨噬細胞在不同的微環(huán)境下可極化為2種類型：以

2、分泌促炎因子為主的M1型和以分泌抗炎因子為主的M2型。存在于巨噬細胞膜上的Toll樣受體（Toll like receptor，TLR）通常可通過促進炎癥介質(zhì)的釋放來抵御外來侵害。TLR2的激活可使巨噬細胞產(chǎn)生促炎或抗炎作用，探索CD38缺失對巨噬細胞TLR2作用的影響及機制具有重要意義。
　　方法和結(jié)果：1. CD38-/-小鼠原代的腹腔巨噬細胞的培養(yǎng)、分離和功能分析：Western Blot結(jié)果顯示，敲除CD38基因可明顯抑制

3、小鼠巨噬細胞TLR2、Sirt1和p65蛋白表達；2.RAW264.7細胞的培養(yǎng)和功能分析：Real-time PCR結(jié)果表明，TLR2激動劑HKLM可使RAW264.7細胞中的IL-1βmRNA表達水平下調(diào)，而IL-10 mRNA表達水平上升；3.抑制RAW264.7細胞CD38基因表達及功能分析：利用CRISPR/dCas9技術(shù)抑制 RAW264.7細胞 CD38基因表達并采用BioRay的蛋白芯片檢測炎性因子，觀察到抑制CD38基

4、因表達可使MCP-1、IL-1 alpha、MIP-1 alpha、RANTES、G-CSF蛋白表達顯著升高，而Eotaxin2、Fas Ligand、Fractalkine、IL-9、LIX、IL-1270蛋白表達下降；4. CD38缺失調(diào)節(jié)巨噬細胞功能的機制分析：Sirt1激動劑白藜蘆醇（RSV）顯著抑制RAW264.7細胞TLR2、p65和Ac-p65蛋白表達，而 Sirt1抑制劑尼克酰胺（NAM）則可明顯促進RAW264.7細胞

5、的TLR2蛋白表達。此外，NF-κB抑制劑 PDTC可顯著抑制RAW264.7細胞TLR2的mRNA及蛋白表達。
　　結(jié)論：1.敲除小鼠 CD38基因可明顯下調(diào)巨噬細胞的TLR2、Sirt1和p65表達以及影響巨噬細胞相關(guān)炎性因子如IL-1β或抗炎因子如IL-10的表達和分泌，提示CD38介導(dǎo)的TLR2激活可能參與巨噬細胞的炎癥反應(yīng)。2. CD38缺失調(diào)節(jié)巨噬細胞功能的機制可能與CD38缺失上調(diào)Sirt1活性，使NF-κB去乙酰化