肺泡上皮細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞抗Mtb感染中TLR信號(hào)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、肺結(jié)核是結(jié)核分枝桿菌引起的人畜共患傳染病，肺臟巨噬細(xì)胞是結(jié)核分枝桿菌感染機(jī)體后的主要寄居場(chǎng)所，在抗結(jié)核分枝桿菌感染免疫中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)研究表明肺臟上皮細(xì)胞在抵抗外源微生物入侵中也發(fā)揮著重要保護(hù)，而機(jī)體抵抗外源病菌依賴于多種細(xì)胞之間的相互作用。因此模擬體內(nèi)肺泡類似的氣液相生長(zhǎng)的細(xì)胞模型探究上皮細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染免疫反應(yīng)的調(diào)控機(jī)制，將有助于進(jìn)一步闡明結(jié)核分枝桿菌感染的分子機(jī)制。
　　本研究采用人肺泡上皮細(xì)胞A549

2、與單核巨噬細(xì)胞U937氣液相共培養(yǎng)系統(tǒng)，通過(guò)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌H37Rv分別感染或共感染兩種細(xì)胞后巨噬細(xì)胞Toll-樣受體(TLR)信號(hào)及其下游炎癥因子的變化，試圖揭示肺泡上皮細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞抗結(jié)核分枝桿菌感染的免疫調(diào)節(jié)作用及其相關(guān)機(jī)制。得到的相關(guān)結(jié)果如下：
　　(1)在共培養(yǎng)模型中，H37Rv感染U937后可以激活U937細(xì)胞中TLR信號(hào)通路(TLR2/4/6/8、MyD88、TRAF6、NF-kB)的表達(dá)進(jìn)而刺激炎癥因子IL-1β

3、/2/6/8/10/12β的表達(dá)，誘發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng);當(dāng)U937及A549共感染結(jié)核分枝桿菌后U937 TLR信號(hào)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)反而低于共培養(yǎng)單獨(dú)感染U937組，A549上皮細(xì)胞可能在調(diào)控巨噬細(xì)胞的免疫反應(yīng)中起到了特殊的作用，使得A549在一定程度上減輕共培養(yǎng)U937細(xì)胞中TLR信號(hào)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
　　(2) PI3K抑制劑LY294002干預(yù)后可以在整體上降低共培養(yǎng)模型中U937抗H37Rv感染TLR信號(hào)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)強(qiáng)度。但

4、是在有LY294002的情況下，共培養(yǎng)共感染組的U937細(xì)胞較共培養(yǎng)單獨(dú)感染U937組TLR信號(hào)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)更強(qiáng)烈。機(jī)理上，共培養(yǎng)共感染組的U937細(xì)胞內(nèi)GSK3β表達(dá)顯著高于共培養(yǎng)單獨(dú)感染U937，表明LY294002可以通過(guò)降低pGSK3β的表達(dá)提高GSK3β的活性，抑制A549細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用。說(shuō)明LY294002的存在能夠阻斷A549減輕共培養(yǎng)U937細(xì)胞中TLR信號(hào)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的作用。
　　(3)當(dāng)利

5、用LiCl抑制PI3K下游蛋白GSK3β后，LiCl干預(yù)下U937細(xì)胞中TLR信號(hào)介導(dǎo)的炎癥因子的下調(diào)與GSK3β活性形式蛋白的下調(diào)同時(shí)存在。以上結(jié)果顯示，在共培養(yǎng)模型中GSK3β在A549上皮細(xì)胞與U937單核巨噬細(xì)胞抗Mtb感染的炎癥反應(yīng)中起到了重要的平衡作用。
　　(4)當(dāng)雷帕霉素抑制PI3K下游蛋白mTOR后，會(huì)顯著上調(diào)共培養(yǎng)感染模型中U937細(xì)胞TLR4、TLR6、IL-6、IL-12β的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示抑制mTOR后