腸源性膿毒癥腹腔滲液致急性肺損傷的機(jī)理研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察腸源性膿毒癥腹腔滲液門(mén)、腔靜脈注射所致肺損傷情況，探索腸源性膿毒癥腹腔滲液導(dǎo)致急性肺損傷的機(jī)理。
　　方法：采用清潔級(jí)健康成年SD大鼠108只，隨機(jī)提取12只作為模型組（腹腔滲液組），采用盲腸結(jié)扎并穿孔法(CLP)，制備腸源性膿毒癥腹腔滲液（EFIS）模型，采集腹腔滲液，以精密過(guò)濾輸液器（過(guò)濾介質(zhì)孔徑5μm）過(guò)濾去除直徑大于5μm的顆粒狀物，濾出液備用；其余96只大鼠隨機(jī)分為滲液組（E組，n=48）和對(duì)照組（S組，n

2、=48）；每組再隨機(jī)分為門(mén)靜脈亞組（PV組、n=24）、腔靜脈亞組（VC組、n=24），各亞組按1h，2h，4h，6h時(shí)間點(diǎn)再分為4個(gè)次亞組，每個(gè)次亞組6只大鼠，共16個(gè)次亞組。E組分別經(jīng)門(mén)、腔靜脈注射處理后的腹腔滲液（1ml/只），S組注射等量的無(wú)菌生理鹽水；各組大鼠分別于注射后第1h，2h，4h，6h時(shí)間點(diǎn)經(jīng)腹主動(dòng)脈采血、處死后取材肺標(biāo)本、收集肺泡灌洗液（BALF）；觀察肺的形態(tài)學(xué)改變；測(cè)定肺濕/干比值(W/D)；肺組織經(jīng)固定、切片

3、、染色處理后，光鏡下閱片、病理學(xué)評(píng)分；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）測(cè)定腹腔滲液、血清及BALF中TNF-α及IL-6含量。MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定腹腔滲液、血清及BALF中LPS含量；所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為具有顯著差異。
　　結(jié)果：
　　1)每只大鼠可采集5-10ml腹腔滲液，其性狀為淡黃色或淡粉色略混濁樣液體。細(xì)菌

4、涂片鏡檢見(jiàn)革蘭氏陰性桿菌，細(xì)菌培養(yǎng)分離出8株細(xì)菌，其中大腸桿菌菌落數(shù)最多；腹腔滲液中亦檢測(cè)出一定水平的LPS、TNF-α及IL-6。
　　2)兩組對(duì)照組（PV-S、VC-S組）各觀察時(shí)間點(diǎn)的肺形態(tài)學(xué)及光鏡所見(jiàn)、病理學(xué)評(píng)分、肺濕/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6水平均無(wú)明顯差異，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。滲液組（PV-E、VC-E組）與對(duì)照組（PV-S、VC-S組）相比較：各觀察時(shí)間點(diǎn)肺形態(tài)學(xué)及

5、光鏡所見(jiàn)差異顯著，肺組織病理學(xué)評(píng)分、肺濕/干重比值(W/D)、血清及BALF中LPS、TNF-α及IL-6測(cè)定值均較對(duì)照組（PV-S、VC-S組）明顯增高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（aP＜0.01，bP＜0.01）。3)肺臟大體形態(tài)學(xué)及光鏡所見(jiàn)：門(mén)靜脈組（PV-E）各時(shí)間點(diǎn)肺臟大體觀：肺的水腫、出血程度均較腔靜脈組（VC-E）明顯；鏡下所見(jiàn)：肺泡壁、肺間質(zhì)水腫程度，肺泡腔中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞浸潤(rùn)程度，肺泡間質(zhì)、肺泡腔充血出血程度均較腔靜脈

6、組（VC-E）明顯；
　　4)病理學(xué)評(píng)分：PV-E組各時(shí)間點(diǎn)肺組織病理學(xué)評(píng)分均較VC-E組高，PV-E組1h即出現(xiàn)明顯肺損傷，出現(xiàn)時(shí)間較VC-E組早，且隨時(shí)間呈遞進(jìn)式加重，PV-E組與VC-E組病理學(xué)評(píng)分相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（aP＜0.05）。
　　5)肺濕/干重比值(W/D)測(cè)定：PV-E組與VC-E組各觀察時(shí)間點(diǎn)的肺濕/干重比值(W/D)相比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（aP＜0.05）；
　　6)血清及BALF

7、中LPS水平：PV-E組與VC-E組各時(shí)間點(diǎn)LPS水平均呈逐漸下降趨勢(shì)，但PV-E組下降更明顯；與VC-E組相比較，1h、2h、4h時(shí)間點(diǎn)LPS水平差異明顯，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（bP＜0.05），兩組間6h時(shí)間點(diǎn)LPS水平無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　7)血清及BALF中TNF-α及IL-6水平：PV-E組與VC-E組血清及BALF中TNF-α及IL-6水平的測(cè)定水平在各觀察時(shí)間點(diǎn)均逐漸增高，TNF-α水平4h達(dá)峰值，達(dá)峰值后6

8、h有下降趨勢(shì)；IL-6水平6h達(dá)最高值。PV-E組與VC-E組相比較，各時(shí)間點(diǎn)TNF-α及IL-6水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（aP＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?、?利用CLP方法可成功制備腸源性膿毒癥模型，腹腔滲液經(jīng)門(mén)靜脈及腔靜脈注射均可造成大鼠急性肺損傷；
　　⑵.腸源性膿毒癥腹腔滲液中存在大腸桿菌為主的多種致病菌、LPS、TNF-α及IL-6等主要成分；
　?、?門(mén)靜脈組血清及肺泡灌洗液中LPS水平低于腔靜脈