FGFR2在成年小鼠內(nèi)耳中的表達(dá)及與聽功能相關(guān)性的研究.pdf

1、細(xì)胞因子是調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長和發(fā)育的因素之一，其與細(xì)胞膜上的特異性受體結(jié)合后，觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)一系列生化反應(yīng)，導(dǎo)致DNA合成。成纖維細(xì)胞生長因子(fibroblastgrowthfactors，F(xiàn)GFs)屬于肝素結(jié)合生長因子家族(heparinbindinggrowthfactor,HBGF)，是一種多功能非特異性活性物質(zhì)，能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和功能的多肽家族，對內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等多種中胚層和神經(jīng)外胚層來源的細(xì)胞有促進(jìn)D

2、NA合成和促進(jìn)細(xì)胞分裂作用，還可延緩細(xì)胞的衰老。成纖維細(xì)胞生長因子受體(fibroblastgrowthfactorreceptors，F(xiàn)GFRs)屬于免疫球蛋白樣受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，PKT)家族，目前己對這個(gè)重要的基因家族在多種生物學(xué)過程中的作用獲得了有價(jià)值認(rèn)識。這些作用包括中胚層的誘導(dǎo)和形成；細(xì)胞的生長、移行和分化；器官的形成和維護(hù)；神經(jīng)的分化和存活；惡變；傷口的愈合。內(nèi)耳是調(diào)節(jié)聽力和平衡的

3、器官，來源于外胚層鄰近后腦的生長板。生長板的誘導(dǎo)、隨后的形態(tài)形成以及內(nèi)耳上皮細(xì)胞和感覺神經(jīng)元的分化都涉及到耳內(nèi)部間和耳與非耳部之間的信號的相互作用。已有研究表明，在脊椎動(dòng)物中，成纖維細(xì)胞生長因子家族的成員控制機(jī)體輪廓和器官的形成，成纖維細(xì)胞生長因子及其受體在內(nèi)耳發(fā)育、結(jié)構(gòu)功能維持、損傷修復(fù)過程中起重要作用。FGFR2在胚胎期的內(nèi)耳中有表達(dá)，其對內(nèi)耳的正常形成很關(guān)鍵，尚未見其在出生后小鼠內(nèi)耳中的表達(dá)和在聽功能方面作用的報(bào)道。 為探

4、討FGFR2基因在成年小鼠內(nèi)耳中的表達(dá)情況和其在聽功能方面的作用，本實(shí)驗(yàn)按如下三部分完成。第一部分以同窩出生的1月大小的FGFR2功能降低(基因型為FGFR2-Neo-250MT/WT，MT)為模型小鼠和功能正常小鼠(野生型；簡稱WT)為實(shí)驗(yàn)對象，觀察兩種動(dòng)物的聽功能并比較腹腔注射慶大霉素后二者之間的聽功能變化。第二部分采用免疫組化法，用FGFR2基因的cDNA質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)錄合成RNA探針，以原位雜交的方法觀察內(nèi)耳組織中FGFR2基因mR

5、NA的表達(dá)分布。第三部分觀察內(nèi)耳組織學(xué)切片：常規(guī)HE染色，光鏡下觀察上述兩種動(dòng)物模型在內(nèi)耳組織形態(tài)學(xué)上有無變化；腹腔注射Brdu，觀察內(nèi)耳組織中細(xì)胞的增生情況。 同窩出生的成年MT模型小鼠和WT小鼠在聽功能方面無明顯差異；注射GM后2周，MT小鼠的ABR反應(yīng)閾較低、波幅較高，聽功能損失似較WT小鼠輕。 FGFR2mRNA在WT成年小鼠耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)中表達(dá)；耳蝸的其它組織中表達(dá)陰性。注射GM后，F(xiàn)GFR2基因mRNA的表

6、達(dá)在FGFR2功能降低和功能正常兩組動(dòng)物中無明顯差異，與注射GM前相比，F(xiàn)GFR2的表達(dá)均增強(qiáng)。 MT組及WT組小鼠的耳蝸結(jié)構(gòu)無明顯異常。通過Brdu檢測，在MT成年小鼠的內(nèi)耳組織中，耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和螺旋韌帶的成纖維細(xì)胞增生明顯。 部分降低FGFR2表達(dá)的成年小鼠耳蝸在大體上無畸形，在光鏡下觀察，內(nèi)耳組織形態(tài)學(xué)無異常。 正常成年小鼠FGFR2主要在耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)中表達(dá)。 無干擾情況下，F(xiàn)GFR2部