抗CD71人-鼠嵌合抗體(D2C)的表達、生物學特性、體外抗腫瘤效應及其體內(nèi)腫瘤定位和抗體分布研究.pdf

1、同濟醫(yī)科大學博士學位論文抗CD71人-鼠嵌合抗體(D2C)的表達、生物學特性、體外抗腫瘤效應及其體內(nèi)腫瘤定位和抗體分布研究姓名：王碩申請學位級別：博士專業(yè)：免疫學指導教師：沈關(guān)心2000.5.1同濟醫(yī)科大學 博士研究生畢業(yè)論文效應用。由于人．鼠嵌合抗體保留了單克隆抗體的抗原識別特異性：同時又大大降低了鼠源單克隆抗體對人體的免疫原性。因此，研制人一鼠嵌合抗一體，并進一步對其生物學特性和抗腫瘤效應進行研究，具有較高的實用價值。本研究在原有構(gòu)

2、建的抗C D 7 1 人一鼠嵌合抗體表達載體基礎(chǔ)之上，( 1 )進行了該抗體( D 2 C ) 在體外真核細胞( S P 2 ／O ) 中的表達研究；( 2 ) 對D 2 C陽性表達轉(zhuǎn)染瘤細胞進行了克隆篩選和其生物學特性的研究；( 3 ) 對D 2 C的體外免疫學或抗腫瘤效應進行了初步研究；( 4 ) 通過”1 I 標記的D 2 C 進行了人體腫瘤異種移植動物體內(nèi)腫瘤定位和抗體分布的研究。一、抗C D 7 1 人一鼠嵌合抗體( D 2

3、C ) 在真核細胞中的表達將重鏈表達載體( C h i 7 5 7 9 V H —P Y 卜E x p r ) 和輕鏈表達載體C h i 7 5 7 9 V L -P K - E x p r ) 經(jīng)體外電轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染鼠雜交瘤細胞( S P 2 ／O ) ，并得到穩(wěn)定表達。經(jīng)E L I S A 法檢驗陽性轉(zhuǎn)染瘤細胞培養(yǎng)上清，證明其表達蛋白質(zhì)產(chǎn)物中同時具有人I g G 重鏈恒定區(qū)( C Y ) 和輕鏈恒定區(qū)( c K ) 蛋白序列；另外，通

4、過間接免疫熒光流式細胞術(shù)( F C M ) 以及間接免疫熒光顯微技術(shù)，證明該表達產(chǎn)物保留有其親本鼠源單克隆抗體( 7 5 7 9 ) 重鏈可變區(qū)( V 。)和輕鏈可變區(qū)( V 1 ) 蛋白序列；能夠特異性識別和結(jié)合表達于靶細胞表面的C D 7 1 分子。二、分泌抗C D 7 1 人一鼠嵌合抗體( D 2 C ) 轉(zhuǎn)染瘤細胞的克隆篩選及其生物學特性研究對經(jīng)鑒定表達陽性的轉(zhuǎn)染瘤細胞，經(jīng)過常規(guī)有限稀釋法進行了兩次克隆篩選。并通過多次E L I

5、 S A 鑒定，選擇高分泌克隆，進行了擴增保種。經(jīng)過近半年的連續(xù)體外培養(yǎng)，轉(zhuǎn)染瘤細胞保持了穩(wěn)定的抗體分泌。通過標準人I g G 和鼠I g G 濃度曲線比較分析，1 ×1 0 5 ／5 m l 轉(zhuǎn)染瘤細胞和其親本雜交瘤細胞( 7 5 7 9 ) ，培養(yǎng)5 天的上清中，轉(zhuǎn)染瘤細胞嵌合抗體分泌量以及雜交瘤細胞( 7 5 7 9 ) 單抗分泌量分別為0 ．5 ug ／m l ～5ug ／m l 和1 2 ．5ug ／m l ～2 5