應用單管PCR擴增測序分型法分析成都漢族HLA-DRB1基因多態(tài)性.pdf

1、研究背景與目的意義:
　　人類主要組織相容性抗原復合體(MHC)又稱人類白細胞抗原(HLA),是目前所知最為復雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng),是調(diào)控人體特異性免疫應答和決定疾病易感性個體差異的主要基因系統(tǒng)。目前在人類學研究、法醫(yī)學、免疫學、器官移植和疾病相關(guān)性研究等領(lǐng)域有廣泛的應用。但因為HLA具有高度的多態(tài)性,其分布有顯著人種、民族和地理的差別,使得某些基因的頻率在不同種族之間差別很大。因此在研究HLA之前,必須先進行群體調(diào)查,建立不同民族

2、基因數(shù)據(jù)庫。直至目前中國人群HLA基因座基因多態(tài)性和分布頻率的研究尚未充分進行,而四川漢族HLA-DRB1基因的分型資料更是空白。而目前對于HLA的研究,存在各種以PCR為基礎(chǔ)的基因分型方法,雖比以往血清學和細胞學的方法大有改進,但仍覺繁瑣,因此有必要尋找新型的方法,使研究工作更簡便有效。此次應用新的DNA分型技術(shù)分析成都漢族個體HLA-DRB1等位基因分布頻率,使以后HLA的研究工作更為快捷高效,同時為進一步研究HLA-DRB1與人體

3、特異性免疫應答和疾病的關(guān)聯(lián)提供背景資料。
　　材料與方法:
　　1)材料:
　　①樣品:四川成都地區(qū)三代以內(nèi)無血緣關(guān)系的漢族健康個體的外周血標本90份各2mL,以EDTA抗凝,年齡22-67歲,男36例,女54例。②工具酶與生化試劑:10×Buffer,25 mM MgCl2,2.5 mM dNTPs, TaqDNA聚合酶。無水乙醇、飽和酚,氯仿,濃鹽酸,氯化鈉,Tris、EDTA,瓊脂糖。
　　2)方法:

4、>　?、倩蚪MDNA的提取。
　?、贖LA-DRB1基因分型方法:將設(shè)計合成的8個引物和其它反應物放在一個反應管中擴增,然后將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖電泳,陽性產(chǎn)物進行測序,對90名無血緣關(guān)系的健康個體進行HLA-DRB1基因分型。
　　結(jié)果:
　　共檢出39種 HLA-DRB1等位基因,基因頻率較高的有HLA-DRB1*0901(26.11％),1202(7.22%),同時檢測出HLA-DRB1*AHAW、HLA-DRB1

5、*DRw12、HLA-DRB1*w13b等少見等位基因。統(tǒng)計分析表明該群體 HLA-DRB1位點的基因型分布符合 Hardy Weinburg平衡(χ2=806.46,df=780,P>0.05)。
　　結(jié)論:
　?、僮C實了單管PCR擴增測序分型法用于HLA-DRB1基因分型的可靠性和適用性,比以往其它的SBT-PCR的方法簡便快捷和高效。
　?、谔峁┝顺啥紳h族群體的基因分布頻率資料,為進一步研究 HLA-DRB1與人