兩面針、白花丹抗腫瘤活性物質及其金屬配合物的抗腫瘤作用初步研究.pdf

1、目的:檢測40種化合物的體外抗腫瘤活性，篩選出體外對腫瘤細胞有殺傷作用的化合物；研究篩選出的對腫瘤細胞有殺傷作用的化合物體外對小鼠原代肝細胞的影響，建立本實驗室體外評價藥物肝毒性的方法；將篩選出的對腫瘤細胞有殺傷作用，肝毒性低的化合物進行體內藥效學和毒理學的初步研究； 方法:(1)采用MTT法測定40種化合物對7株腫瘤細胞的細胞毒性，篩選出體外對腫瘤細胞有殺傷作用的化合物并計算出各化合物對各腫瘤細胞的IC<,50>值。(2)兩步

2、灌流法分離提取小鼠原代肝細胞，觀察原代肝細胞生長全過程并檢測培養(yǎng)上清中的ALT、ALB、LDH、BUN的變化情況，確定最佳實驗時間和實驗方案；通過MTT法檢測各種化合物對原代培養(yǎng)肝細胞的半數(shù)抑制率IC<,50>值并測定肝細胞活性指標了解各化合物對肝細胞的影響；建立本實驗室體外評價藥物肝毒性的方法；(3)對篩選出體外對腫瘤細胞有殺傷作用、肝毒性低的化合物進行體內急性毒理學試驗，得出化合物的LD<,50>值；建立荷瘤小鼠S180模型，腹腔注

3、射化合物N-17觀察體內抑瘤效果及對主要臟器的影響，肝組織勻漿測定SOD、MDA、NO、GSH-PX的含量；瘤組織做病理組織學檢查。 結果:(1)40種化合物中篩選出10種對7株腫瘤細胞均有較好的細胞毒性，并計算得到每種化合物對7株腫瘤細胞的半數(shù)抑制率IC<,50>值；(2)通過兩步灌流法分離提取的原代肝細胞24h貼壁，2到5天生長良好，ALT、LDH維持平穩(wěn)水平，ALB、BUN處于活性高峰，5天后肝細胞脫落死亡迅速，各項肝活性

4、指標也有相應改變，從而確定采用原代肝細胞進行肝毒性實驗的最佳時間為2-5天；參考10種初篩得到的化合物對原代肝細胞半數(shù)抑制率IC<,50>值和對原代肝細胞各種活性指標的影響，得到N-1、N-3、N-17 3種化合物對原代肝細胞的IC<,50>值較高，對肝細胞各種活性指標影響不大，有進行更深入研究的價值；(3)化合物N-17對S180肉瘤小鼠有抑制作用，并呈現(xiàn)出劑量依賴關系。N-17在10mg/kg對S180肉瘤小鼠的抑瘤率為42.9％，

5、在2.5-10mg／kg的劑量范圍，N-17對S180肉瘤小鼠的抑瘤率分別為1.95-42.9％，呈劑量依賴關系。S180小鼠各劑量組對肝臟、脾臟影響不大。S180小鼠高劑量組對胸腺有抑制作用，在2.5-10mg/kg的劑量范圍，N-17對S180肉瘤小鼠的胸腺抑制率分別為5.69-18.51％，呈劑量依賴關系；N-17能明顯提高S180肉瘤小鼠SOD活性，降低MDA含量，增加GSH-PX活性，降低了NO的含量；瘤組織病理切片可見各劑量

6、組有不同程度的瘤細胞壞死，其中高劑量組瘤細胞大片壞死。 結論:40種化合物中篩選出10種對腫瘤細胞有殺傷作用的化合物。建立毒性篩選模型，從10種化合物中篩選出N-1、N-3、N-17 3種化合物對腫瘤細胞有殺傷作用，肝毒性低。體內藥效學實驗發(fā)現(xiàn)N-17對昆明種小鼠S180肉瘤腫瘤模型有明顯的抑制作用，且呈劑量依賴關系，有免疫毒性。N-17抗腫瘤活性與其直接對腫瘤細胞的殺傷作用有關，同時N-17能夠增強抗氧化酶的活力，增強機體的抗