中藥兩面針、白花丹提取物體外抗腫瘤活性篩選及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：對中藥兩面針、白花丹提取物進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選并對其抗癌分子機(jī)制進(jìn)行研究。 方法：1、以中藥兩面針、白花丹提取物為實驗對象，以肺癌SPC-A-1株，鼻咽癌7111株，鼻咽癌Ecv2株，舌癌Tca8113株為實驗癌株，應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞的增殖活性，進(jìn)行體外抗腫瘤活性篩選。2、以氯化兩面針堿和鵝掌楸堿銀配合物為實驗對象，以肺癌SPC-A-1株，鼻咽癌7111株為實驗癌株，采用DNA ladder片斷化分析、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、

2、酶聯(lián)免疫法(Elisa法)進(jìn)行凋亡檢測。3、以氯化兩面針堿和鵝掌楸堿銀配合物為實驗對象，以肺癌SPC-A-1株，鼻咽癌7111株為實驗癌株，采用RT-PCR、Real-time PCR檢測細(xì)胞bcl-2、bax、C-erbB-2 mRNA表達(dá)水平，免疫細(xì)胞化學(xué)法考察細(xì)胞bcl-2、bax、C-erbB-2蛋白表達(dá)水平的改變，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)一氧化氮濃度，進(jìn)行凋亡分子機(jī)制的研究。 結(jié)果：1、中藥兩面針、白花丹提取物經(jīng)體外抗

3、腫瘤活性篩選，其中氯化兩面針堿、鵝掌楸堿鉑配合物Ⅰ、鵝掌楸堿鉑配合物Ⅱ、鵝掌楸堿金配合物Ⅰ、鵝掌楸堿金配合物Ⅱ、鵝掌楸堿銀配合物、鵝掌楸堿鋅配合物、鵝掌楸堿錫配合物、鵝掌楸堿鉬配合物、白花丹素、白花丹素銅配合物、白花丹素鈷配合物、白花丹素鎳配合物等13種化合物具有體外抗腫瘤活性。2、在氯化兩面針堿和鵝掌楸堿銀配合物的作用下，肺癌SPC-A-1株，鼻咽癌7111株出現(xiàn)典型的凋亡特征，瓊脂糖電泳出現(xiàn)典型的DNA梯帶，細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)出細(xì)胞核裂

4、解、染色質(zhì)聚集、核碎裂，胞漿濃縮、有空泡形成，對樣本進(jìn)行Caspase-3活性檢測后發(fā)現(xiàn)藥物作用后細(xì)胞中Caspase-3含量明顯高于對照組。3、在氯化兩面針堿和鵝掌楸堿銀配合物的作用下，用藥組肺癌SPC-A-1株，鼻咽癌7111株細(xì)胞較對照細(xì)胞bcl-2、C-erbB-2 mRNA及其蛋白表達(dá)降低，同時bax mRNA及其蛋白表達(dá)升高；用藥組細(xì)胞較對照細(xì)胞內(nèi)NO濃度升高。 結(jié)論：氯化兩面針堿和鵝掌楸堿銀配合物有促進(jìn)肺癌SPC-