中藥材中細(xì)菌群體感應(yīng)效應(yīng)劑的篩選和研究.pdf

1、群體感應(yīng)(quorum sensing,QS)是細(xì)菌根據(jù)細(xì)胞密度變化進(jìn)行基因表達(dá)調(diào)控的一種生理行為。隨著細(xì)胞密度增加,細(xì)菌產(chǎn)生的信號(hào)分子濃度逐漸增加,當(dāng)信號(hào)分子積累到一定濃度時(shí)會(huì)啟動(dòng)相關(guān)基因的表達(dá),如共生、細(xì)菌毒性、競(jìng)爭(zhēng)、接合、抗生素的產(chǎn)生、運(yùn)動(dòng)性、孢子及生物膜的形成等。篩選各種QS效應(yīng)劑可以調(diào)節(jié)和控制細(xì)菌的各種行為,因此具有非常重要的生物學(xué)意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本研究利用對(duì)AHLs敏感的指示菌C.violaceum CV026的顯色反應(yīng)

2、,嘗試從中國(guó)傳統(tǒng)的中藥材中篩選天然的QS效應(yīng)劑。研究中首先確立了AHLs信號(hào)分子的提取途徑和固體平板檢測(cè)方法,然后探討了液體培養(yǎng)基中半定量檢測(cè)信號(hào)分子的影響因素,發(fā)現(xiàn)以乙醇溶解紫色素的方法優(yōu)于水飽和丁醇法萃取紫色素,乙醇的最適使用濃度為55.6％,最適檢測(cè)波長(zhǎng)為580nm。從多種中藥材中篩選QS效應(yīng)劑的研究表明,與單獨(dú)添加信號(hào)分子相比,連翹等八種中藥和信號(hào)分子一起添加時(shí)C.violaceum CV026的紫色減弱,其中可能含有細(xì)菌群體感

3、應(yīng)抑制劑;而三種藥材魚(yú)腥草、金銀花、柴胡和信號(hào)分子一起添加C.violaceum CV026分泌紫色增強(qiáng),其中可能含有AHLs功能的類似物。然后進(jìn)一步確定了三種中藥材中的增色作用物質(zhì)是藥材自身所含有,而非外源污染所致。魚(yú)腥草可能含有與信號(hào)分子協(xié)同使C.violaceum CV026顯色增強(qiáng)的物質(zhì),而非AHLs功能類似物;柴胡和金銀花單獨(dú)均可使C.violaceum CV026顯色,表明該物質(zhì)中含有信號(hào)分子的功能類似物,且柴胡中的活性物質(zhì)