腎臟病患者非酯化脂肪酸及脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白的研究.pdf

1、目的：腎病患者體內(nèi)存在脂代謝紊亂，通過血中非酯化脂肪酸的測定了解脂代謝紊亂導致腎臟功能受損的作用機制。通過對脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白測定，尋求慢性腎臟病早期診斷的生化指標。
　　 慢性腎臟病也存在脂代謝紊亂，脂代謝紊亂能促發(fā)腎小球硬化和腎小管間質損傷，與慢性腎臟疾?。–KD）的進展有關。非酯化脂肪酸（NEFA；又名游離脂肪酸，F(xiàn)FA），作為甘油三酯（TG）的分解產(chǎn)物和合成原料，它的代謝是脂代謝過程中的重要部分。在細胞需要量增多或

2、細胞外FFA濃度過高時，F(xiàn)FA可通過蛋白和非蛋白介導機制進入細胞。這些FFA可用于膜的生物合成、通過β氧化產(chǎn)生能量、形成脂質信號分子、轉錄后蛋白修飾和轉錄調(diào)節(jié)。當細胞積聚FFA超過合成和分解代謝需要時，過量脂質轉化為TG儲存于脂質微滴中。脂肪細胞在胞液脂質微滴中可儲存大量過多的FFA。但非脂肪組織儲存脂質能力有限，當超過其儲存能力時就發(fā)生細胞功能障礙或死亡稱為脂毒性（lipotoxicify）。腎病時脂質代謝紊亂，甘油三酯增高，大量脂質

3、在腎臟沉積，脂肪酸是否發(fā)生變化，對腎病的發(fā)生發(fā)展有何作用?鮮有報道。
　　 基于上述原因，本研究以患不同類型的腎病患者為對象，通過了解NEFA的變化，初步探討慢性腎臟病脂質代謝紊亂與腎功能損害的相互作用機制。通過測定血清中A-FABP，尋求一個慢性腎臟病早期診斷的生化指標。
　　 方法：
　　 1.病例篩選及分組
　　 1.1病例篩選首先于2007年11月至2008年10月自河北醫(yī)大二院檢驗科提取腎病內(nèi)科

4、和內(nèi)分泌科住院及門診送檢的血液標本，并記錄病人基本信息（姓名、性別、年齡、病例號、床位號等）。其次，到病案室和門診按照病例號查找病例，記錄病人詳細信息，包括血壓、既往病史、現(xiàn)病史、家族史、病理診斷等，將信息完整的標本一一登記，按臨床診斷及病理診斷分類。然后，依據(jù)美國腎臟基金會慢性腎臟病及透析臨床實踐指南（K/DOQI）進行病例篩選，篩選標準如下：首發(fā)成年病例（年齡<70歲），未經(jīng)過激素及透析治療；有病理診斷或影像學診斷的病例；無其他心、

5、肺、肝等重大疾患；無其他內(nèi)分泌代謝性疾??；無高血壓、過敏性紫癜、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等導致腎損害。糖尿病病例篩選標準：門診檢出的Ⅱ型糖尿病病人（年齡<70歲）；無任何糖尿病并發(fā)癥；無其他心、肺、肝、腎等重大疾患；無其他內(nèi)分泌代謝性疾病。對照組篩選標準：門診查體的健康成年人（年齡<70歲）；無心、肺、肝、腎等疾患；無甲亢等代謝性疾?。粺o高血壓、高血脂和高血糖；無乙型肝炎、丙型肝炎等傳染性疾病。
　　 1.2標本分組：103份病人血清標本

6、中，原發(fā)性腎小球腎炎49例，43例有病理診斷，6例有影像學診斷。本研究將其中臨床表現(xiàn)符合腎病綜合征的23例另列為腎病綜合征組。糖尿病腎病14例，3例有病理診斷，11例有影像學診斷。糖尿病40例。因此，本研究設計分為五組①原發(fā)性腎小球腎炎組（PGN組），26例；②腎病綜合征組（NS組），23例；③糖尿病腎病組（DN組），14例；④糖尿病組（DM組），40例；⑤對照組（Con組），23例。
　　 2.銅顯色法測定血清非酯化脂肪酸（N

7、EFA）總量。
　　 3.ELISA方法測定各組血清脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白（A-FABP）。
　　 4.紫外-谷氨酸脫氫酶法測血清尿素氮（BUN）。用7170全自動生化分析儀測定。
　　 5.堿性苦味酸法測血肌酐（CRE）。用7170全自動生化分析儀測定。
　　 6.雙縮脲比色法測血清總蛋白（TP）。用7170全自動生化分析儀測定。
　　 7.溴甲酚綠法測血清白蛋白（ALB）。用7170全自動生

8、化分析儀測定。
　　 8.在7171全自動生化分析儀上測定的其它生化指標
　　 8.1酶法測定血清甘油三酯（TG）。
　　 8.2膽固醇氧化酶終點法測定血清膽固醇（CHO）。用7170全自動生化分析儀測定。
　　 8.3勻相測定法測定血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-CHO）。用7170全自動生化分析儀測定。
　　 8.4葡萄糖氧化酶法測定空腹血糖（FBG）。
　　 結果：
　　 1

9、.非酯化脂肪酸（NEFA）
　　 PGN組、NS組、DN組、DM組和Con組NEFA值，依次為1.01±0.14mmol/L、1.01±0.11mmol/L、1.04±0.07mmol/L、0.90±0.24 mmol/L和0.83±0.26mmol/L.PGN組、NS組、DN組NEFA值均高于Con組。DM組NEFA值與Con組比較，無統(tǒng)計學差異，可能與使用降糖藥物控制血糖接近于正常范圍有關。
　　 2.脂肪細胞型脂肪

10、酸結合蛋白（A-FABP）
　　 PGN組、NS組、DN組、DM組和Con組A-FABP值，依次為8.20±2.93ng/ml、8.35±3.19ng/ml、6.05±1.91ng/ml、5.62±2.07ng/ml和4.27±2.06ng/ml，四個病理組A-FABP值均高于Con組。慢性腎臟病早期，尿素氮、肌酐僅輕度增高，A-FABP也同時增高，尤其在原發(fā)性腎臟疾病血A-FABP升高更為顯著，約為對照組的兩倍左右。提示與傳統(tǒng)

11、的腎病指標尿素氮、肌酐相比，A-FABP可能對慢性腎臟病尤其是原發(fā)性腎臟疾病更有早期診斷價值。
　　 3.尿素氮（BUN）
　　 PGN組、NS組、DN組的BUN值均高于Con組。DM組和Con組相比，血BUN無明顯差異。表明所選慢性腎臟病病例腎功能有輕微損害，但均處于腎功能代償期。
　　 4.肌酐（CRE）
　　 PGN組、NS組、DN組的CRE值均高于Con組。DM組和Con組相比，血CRE無明顯差異

12、。表明所選慢性腎病病例腎功能有輕微損害，但CRE均值均低于178μmol/L，均處于腎功能代償期。
　　 5.總蛋白（TP）
　　 PGN組、NS組和Con組相比，TP明顯降低。DN組TP值也低于Con組，DM組高于正常對照組。表明，慢性腎病時存在低蛋白血癥。糖尿病組總蛋白高出對照組，可能是糖尿病時球蛋白增高引起，有待研究。
　　 6.白蛋白（ALB）
　　 PGN組、NS組、DN組ALB值明顯低于Con

13、組，DM組與Con組無差異。表明，原發(fā)性腎小球腎炎、腎病綜合癥和糖尿病腎病的低蛋白血癥主要表現(xiàn)在血中白蛋白的降低。糖尿病組在未繼發(fā)腎病前不存在低白蛋白血癥，和總蛋白結果綜合提示糖尿病時血中球蛋白可能增高，有待研究。
　　 7.甘油三酯（TG）
　　 PGN組、NS組、DN組、DM組甘油三酯值均高于Con組。表明慢性腎臟病時患者體內(nèi)存在脂代謝紊亂。
　　 8.膽固醇（CHO）
　　 NS組CHO值高于Con

14、組。余三組CHO值與Con組相比無明顯差異。結果支持腎病綜合征的臨床診斷。
　　 9.高密度脂蛋白膽固醇（HDL-CHO）
　　 PGN組、DN組、DM組HDL-CHO值低于Con組。NS組HDL-CHO值與Con組相比無顯著差異。表明慢性腎病時脂代謝紊亂確實存在。腎病綜合征患者HDL-CHO與CHO相比處于相對減低水平。
　　 10.空腹血糖（FBG）
　　 PGN組、NS組和Con組相比，F(xiàn)BG無明顯

15、差異。DN組和DM組FBG值均高于Con組。表明，糖尿病和糖尿病腎病的血糖高于正常組，支持臨床診斷。
　　 11.A-FABP與NEFA相關分析結果
　　 通過相關分析發(fā)現(xiàn)，A-FABP與NEFA之間存在弱相關關系。PGN組、NS組和DM組內(nèi)兩指標有直線相關關系，相關系數(shù)分別為0.446，R=0.469，0.374。DN組未檢出二者有相關關系，可能與組內(nèi)病例例數(shù)較少有關。同上述總蛋白、白蛋白結果分析腎病時存在低白蛋白血癥

16、，血中NEFA卻增高，血中A-FABP與NEFA存在相關關系，提示腎病時血中A-FABP可能與NEFA結合參與胞外的脂肪酸轉運過程。
　　 結論：
　　 1.NEFA在慢性腎臟病早期就有增高，提示慢性腎臟病早期NEFA對腎臟已經(jīng)產(chǎn)生脂毒性作用，可能與慢性腎臟病的進展有關。
　　 2.本研究認為慢性腎臟病早期，尤其是原發(fā)性腎臟疾病早期血清A-FABP水平顯著升高，且靈敏度高于傳統(tǒng)腎病診斷指標BUN、CRE，提示血A