雞大腸桿菌1型菌毛的抗原性分析及pilA基因表達(dá)載體構(gòu)建.pdf

1、　本文首先根據(jù)雞源大腸桿菌1型菌毛結(jié)構(gòu)基因pilA序列，在其保守區(qū)設(shè)計(jì)、合成了1對(duì)引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增，從分屬20個(gè)血清型的26個(gè)致病菌株染色體中均得到大小為657bp的陽(yáng)性產(chǎn)物，經(jīng)酶切、連接、轉(zhuǎn)化，篩選所有菌株pilA基因陽(yáng)性克隆，并分別測(cè)定其核酸序列。然后將上述分別帶有不同基因變異類型1型菌毛的雞大腸桿菌GL7(O78，1A)，YR10(O18，1B)及MG10(O11，1C)培養(yǎng)提取菌毛制成單價(jià)1型菌毛油乳劑疫苗及含O78、O18、

2、O11的多價(jià)1型菌毛滅活疫苗。觀察其變化。最后根據(jù)發(fā)表的雞大腸桿菌1型菌毛pilA基因序列，在其同源區(qū)設(shè)計(jì)合成了一對(duì)引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增，分別從雞大腸桿菌GL7分離株(O78，1A)染色體擴(kuò)增到大小約551 bp的DNA片段，用限制性內(nèi)切酶SalⅠ和BamHⅠ同時(shí)酶切所擴(kuò)增的外源基因片段和pET-32a(+)載體，經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化、篩選到重組質(zhì)粒F15pilA/pET-32a(+)。再將此質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至宿主菌BL21(DE3)中，篩選獲得重組菌株