α1，2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對人卵巢癌細(xì)胞RMG-I p38MAPK信號通路介導(dǎo)的凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 探討Lewis y抗原對人卵巢癌細(xì)胞RMG-I的p38MAPK通路介導(dǎo)的凋亡影響。
　　 方法：
　　 以α1,2-巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染前后卵巢癌細(xì)胞RMG-I、RMG-I-H為細(xì)胞模型,利用細(xì)胞免疫熒光方法檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞p38MAPK和p-p38MAPK的細(xì)胞內(nèi)定位；利用RT-PCR和Western blot方法從mRNA和蛋白兩個(gè)水平檢測轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞p38MAPK表達(dá)的變化；以兔抗人IgG抗體

2、處理組為對照,分別利用RT-PCR和Western blot方法檢測Lewis y單克隆抗體處理前后RMG-I-H細(xì)胞p38MAPKmRNA和蛋白表達(dá)水平的變化；以0.1％DMSO為對照,利用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測p38MAPK特異性抑制劑SB203580處理后RMG-I-H凋亡比率的變化,并利用RT-PCR和Western blot方法檢測caspase-3的mRNA和蛋白水平的變化；并利用RT-PCR方法檢測卡鉑和SB203580

3、處理后p38MAPK及caspase-3表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 RMG-I與RMG-I-H的p38MAPK蛋白主要定位在細(xì)胞質(zhì),p-p38MAPK蛋白定位在細(xì)胞核；轉(zhuǎn)染后p38MAPK的mRNA水平明顯高于轉(zhuǎn)染前(P均<0.05)；Lewis y單克隆抗體處理后RMG-I-H細(xì)胞p38MAPKmRNA水平降低(P均<0.05);不同濃度SB203580(0.1 mM,1 mM,10 mM)作用下RMG-I-H細(xì)

4、胞的凋亡率分別為(15.927±0.861)％、(18.18±0.481)％及(33.565±0.912)％,明顯高于空白組和對照組(P均<0.05); SB203580處理后caspase-3的mRNA和蛋白水平均明顯高于空白組和對照組(P均<0.05)；卡鉑處理后p38MAPK及caspase-3 mRNA水平均增加,SB203580處理后,caspase-3mRNA水平增加。
　　 結(jié)論：
　　 說明Lewis y