電針“內(nèi)關(guān)”對心肌肥厚大鼠P38MAPK信號通路的影響.pdf

1、目的：
　　 心肌肥厚是許多心血管疾病發(fā)展的一個重要階段,在先天性心臟病、心肌梗死、心臟瓣膜病、高血壓等多種心血管疾病中,心肌肥厚是共有的病理過程,持續(xù)的外界刺激引起心肌肥厚不斷進展,使心肌氧耗量增加及順應(yīng)性降低,最終導(dǎo)致心臟擴大、充血性心力衰竭甚至猝死,是心血管疾病患病率和死亡率增加的獨立危險因素,隨著左室肥厚的發(fā)生、發(fā)展,猝死、室性心律失常、心肌缺血、心力衰竭等心血管事件的發(fā)生率增加6-10倍。藥物等治療取得了較好的療效,但

2、所帶來的副作用和臨床效應(yīng)還需進一步驗證,介入療法雖然能改善患者的生活質(zhì)量,然而作為有創(chuàng)性的治療技術(shù)不可避免地會發(fā)生各種并發(fā)癥,如血管迷走神經(jīng)反射、血管內(nèi)血栓形成、胸悶、胸痛,甚至導(dǎo)致死亡。因此,如何探明心肌肥厚發(fā)生機制,積極有效的防治心肌肥厚,減少心血管疾病病死率和發(fā)病率已成為國內(nèi)外心血管領(lǐng)域研究熱點和焦點。針灸作為低損傷的治療方法在心臟病的防治中具有較好的療效并且己廣泛應(yīng)用于臨床。本課題在“心胸內(nèi)關(guān)謀”經(jīng)驗總結(jié)和前期研究基礎(chǔ)上,運用現(xiàn)

3、代醫(yī)學(xué)理論與實驗方法研究電針“內(nèi)關(guān)”對心肌肥厚大鼠心肌組織P38MAPK信號通路的影響及作用機制,對臨床防治各種病因的心肌肥厚具有十分重要的理論意義和實用價值。
　　 方法：
　　 3月齡雌性SD大鼠50只,體重180g左右,查隨機數(shù)字表分為5組:正常組、模型組、電針組、p38抑制劑組、電針+p38抑制劑組,每組10只。正常組:每日頸背部皮下注射生理鹽水3mg/kg·d;模型組:以ISO3mg/kg·d頸背部皮下注射14

4、d制備心肌肥厚模型,連續(xù)14天;以心電圖的改變:QRs波和QT波持續(xù)時間延長(QRs＞0.10s),T波形態(tài)改變作為造模成功的標(biāo)志;電針組:每日頸背部皮下注射ISO3.0 mg/kg,針刺雙側(cè)“內(nèi)關(guān)”深度約5mm,接HANS-200電針治療儀,選用連續(xù)波,頻率2Hz,強度為1mA,通電20min,1次/d,14d;p38抑制劑組:每日頸背部皮下注射ISO3.0 mg/kg,p38絲裂原激活蛋白激酶特異性抑制劑SB203580,以0.3m

5、g/kg/d頸背部皮下注射,連續(xù)14d;電針+p38抑制劑組:每日頸背部皮下注射ISO3.0 mg/kg,SB203580以0.3mg/kg/d頸背部皮下注射,雙側(cè)“內(nèi)關(guān)”穴接HANS-200電針治療儀,選用連續(xù)波,頻率2Hz,強度為1mA,通電20min,1次/d,14d。大鼠于第15天稱取體重、左心室重量和全心重量,并計算左心室重量指數(shù)和全心重量指數(shù),心肌組織HE染色,測量左心室壁平均厚度、心肌細(xì)胞平均直徑、心肌纖維橫徑,硝酸還原酶

6、法測定血清和心肌組織NO含量,放射免疫法檢測血清和心肌組織TNF-α、IL-1β含量,免疫組織化學(xué)法檢測心肌p38MAPK、p-p38MAPK免疫陽性細(xì)胞表達(dá);蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測p38MAPK、p-p38MAPK活性,運用圖象分析系統(tǒng)進行檢測,并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.模型組大鼠HW、LVW、HWI、LVWI于造模后升高,均明顯高于正常組,有非常顯著性差異義(p＜0.01);電針組、p38抑制劑組

7、、電針+p38抑制劑組大鼠HW、LVW、HWI、LVWI均明顯低于模型組,有顯著性差異(p＜0.05);電針組、p38抑制劑組、電針+p38抑制劑組之間無顯著性差異(p＞0.05)。
　　 2.模型組大鼠左心室壁平均厚度、心肌細(xì)胞平均直徑、心肌纖維橫徑于造模后升高,和正常組比較,有非常顯著性差異(p＜0.01);電針組、p38抑制劑組、電針+p38抑制劑組大鼠左心室壁平均厚度、心肌細(xì)胞平均直徑、心肌纖維橫徑均明顯低于模型組,和模

8、型組比較有顯著性差異(p＜0.05),電針+p38抑制劑組和模型組比較,有非常顯著性差異(p＜0.01),三組之間比較無顯著性差異(p＞0.05).
　　 3.正常組心肌細(xì)胞染色后心肌結(jié)構(gòu)清晰、完整、均勻,心肌纖維排列整齊,橫紋清楚,無形態(tài)異常;模型組心肌細(xì)胞染色不均,心肌纖維走向紊亂,心肌纖維橫徑增加,心肌纖維之間的結(jié)締組織疏松水腫、增生,細(xì)胞大小不均,心肌細(xì)胞直徑明顯變大,電針組、p38抑制劑組、電針+p38抑制劑組治療后,

9、心肌細(xì)胞稍大,排列尚可,心肌細(xì)胞肥厚程度較模型組減輕,心肌纖維排列稍整齊,水腫和增生明顯改善。
　　 4.模型組大鼠心肌組織和血清NO含量于造模后降低,均明顯低于正常組,有非常顯著性差異義(p＜0.01);電針組、p38抑制劑組、電針+p38抑制劑組大鼠NO均明顯高于模型組,有顯著性差異(p＜0.05);三組之間無顯著性差異(p＞0.05).
　　 5.模型組大鼠心肌組織和血清TNF-α、IL-1β含量于造模后升高,和正

10、常組比較,有非常顯著性差異(p＜0.01);電針組、p38抑制劑組、電針+p38抑制劑組大鼠TNF-α、IL-1β含量均明顯低于模型組,和模型組比較,有顯著性差異(p＜0.05),三組之間比較無顯著性差異(p＞0.05).
　　 6.造模后p38MAPK、p-p38MAPK免疫陽性物增多,平均積分光密度值明顯高于正常組,和正常組比較,有非常顯著性差異(p＜0.01);電針組、p38抑制劑組大鼠平均積分光密度值均明顯低于模型組,和

11、模型組比較,有顯著性差異(p＜0.05),電針+p38抑制劑組有非常顯著性差異(p＜0.01),三組之間比較無顯著性差異(p＞0.05)。
　　 7.模型組大鼠心肌細(xì)胞p38MAPK、p-p38MAPK于造模后升高,和正常組比較,有非常顯著性差異(p＜0.01);電針組、p38抑制劑組p38MAPK、p-p38MAPK均明顯低于模型組,有顯著性差異(p＜0.05),電針+p38抑制劑組和模型組比較有非常顯著性差異(p＜0.01)

12、,三組之間比較無顯著性差異(p＞0.05).
　　 結(jié)論：
　　 1.電針“內(nèi)關(guān)”穴可使心肌肥厚模型大鼠全心重量指數(shù)、左室重量指數(shù)下降,左心室壁平均厚度下降;心肌細(xì)胞平均直徑和心肌纖維橫徑減小,對心肌形態(tài)學(xué)有明顯改善。
　　 2.電針“內(nèi)關(guān)”穴可使心肌肥厚模型大鼠血清和心肌組織NO含量升高,其抗心肌肥厚作用可能是通過升高NO來實現(xiàn)的。
　　 3.電針“內(nèi)關(guān)”穴可以防治心肌肥厚,這種保護作用可能與抑制TNF

13、-α、IL-1β等炎性因子的表達(dá)實現(xiàn)對p38MAPK信號通路調(diào)節(jié)有關(guān)。
　　 4.P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與異丙腎上腺致大鼠心肌肥厚過程,P38MAPK表達(dá)上調(diào)促進心肌肥厚發(fā)生,電針“內(nèi)關(guān)”穴可以明顯抑制心肌肥厚p38MAPK的磷酸化,對心肌細(xì)胞p38信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)可能是電針“內(nèi)關(guān)”防治心肌肥厚的作用機制之一。
　　 5.電針、p38抑制劑、電針+p38抑制劑防治心肌肥厚結(jié)果比較并未見明顯差異,電針+p38抑制劑