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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:原代培養(yǎng)新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolar typeⅡepithelial cell,AT-Ⅱ),利用內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPB)作用建立體外炎癥模型,通過(guò)芪蛭皺肺顆粒干預(yù)細(xì)胞,觀察AT-Ⅱ細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,p38MAPK信號(hào)通路基因的表達(dá)變化,探討芪蛭皺肺顆粒對(duì)慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease,COPD)的作用機(jī)制,為開(kāi)發(fā)研究芪蛭皺肺顆粒
2、提供藥效學(xué)基礎(chǔ)。
方法:取新生SPF級(jí)大鼠乳鼠肺臟,采用胰酶聯(lián)合膠原酶消化法獲取AT-Ⅱ細(xì)胞,分離純化后進(jìn)行體外培養(yǎng),用電鏡觀察鑒定AT-Ⅱ細(xì)胞。取生長(zhǎng)狀況接近的同一代細(xì)胞,設(shè)置空白組、模型組(LPS20ug/ml)、低劑量組(LPS20ug/ml+芪蛭皺肺顆粒50 ug/ml)、中劑量組(LPS20ug/ml+芪蛭皺肺顆粒100 ug/ml)、高劑量組(LPS20ug/ml+芪蛭皺肺顆粒200 ug/ml)。電鏡觀察各組AT
3、-Ⅱ細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),透射電鏡觀察板層小體的變化,免疫組化法檢測(cè)SP-B,Q-PCR法定量檢測(cè)各組AT-Ⅱ細(xì)胞p38、SP-B及Fas基因表達(dá)水平,用Western Blot法半定量檢測(cè)各組AT-Ⅱ細(xì)胞p38、SP-B蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果:
1、成功分離培養(yǎng)大鼠乳鼠原代AT-Ⅱ細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好;
2、LPS成功建立COPD體外炎癥模型,電鏡觀察細(xì)胞發(fā)現(xiàn),與正常組對(duì)比,模型組AT-Ⅱ細(xì)胞板層小體減少,出現(xiàn)空泡樣
4、改變;與模型組對(duì)比,低、中、高劑量組板層小體減少不顯著,出現(xiàn)空泡樣改變減少;
3、與正常組對(duì)比,模型組SP-B基因表達(dá)降低,p38、FAS基因表達(dá)升高(P﹤0.05);與模型組對(duì)比,芪蛭皺肺顆粒低、中、高劑量組能上調(diào)SP-B基因的低水平表達(dá)(P﹤0.05),下調(diào)p38、FAS基因的高水平表達(dá)。
結(jié)論:LPS干預(yù)原代培養(yǎng)大鼠乳鼠AT-Ⅱ細(xì)胞,可誘導(dǎo) AT-Ⅱ細(xì)胞的炎性反應(yīng),改變細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),建立COPD體外炎癥模型,芪
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