與C6膠質(zhì)瘤細胞體外共培養(yǎng)后大鼠神經(jīng)干細胞成瘤性的初步觀察.pdf

1、目的： 探索體外腫瘤微環(huán)境中正常大鼠神經(jīng)干細胞是否可以發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化而具有相關(guān)腫瘤學特性。 方法： 1.利用共培養(yǎng)池(cell culture transwell inserts)建立兩種細胞的體外共培養(yǎng)模型。具體分組為：①實驗組：C6膠質(zhì)瘤細胞十神經(jīng)干細胞，②對照組：星形膠質(zhì)細胞+神經(jīng)干細胞，③空白對照組：無細胞的培養(yǎng)液+神經(jīng)干細胞。 2.應(yīng)用相差顯微鏡及電鏡觀察共培養(yǎng)后NSCs的形態(tài)變化。 3.

2、四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)比色法檢測共培養(yǎng)后NSCs的增殖變化。 4.免疫熒光細胞染色技術(shù)檢測共培養(yǎng)后NSCs P53蛋白表達情況。 5.染色體核型分析檢測共培養(yǎng)后NSCs的染色體變化。 6.將共培養(yǎng)后NSCs接種于裸鼠顱內(nèi)觀察成瘤情況。 結(jié)果： 1.成功建立兩種細胞的體外共培養(yǎng)模型。 2.共培養(yǎng)后NSCs形態(tài)變化：①相差顯微鏡下觀察

3、可見：與對照組相比，實驗組共培養(yǎng)7天后NSCs較對照組細胞球體積變大、細胞數(shù)目相對較多，鏡下可見與對照組在形態(tài)上有較明顯的差別；②電鏡下觀察可見：與對照組相比，實驗組共培養(yǎng)7天后NSCs細胞核較大，核質(zhì)比較高，染色質(zhì)疏松，細胞器也較發(fā)達(粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體較多)。對照組NSCs胞漿較多，細胞器欠發(fā)達。 3.MTT法檢測顯示實驗組中與C6膠質(zhì)瘤細胞共培養(yǎng)后的NSCs增殖較對照組快。 4.實驗組共培養(yǎng)7、14天后NSCs細胞

4、核上未見P53蛋白陽性表達，共培養(yǎng)28天后部分NSCs細胞核上P53蛋白呈陽性表達；對照組及空白對照組共培養(yǎng)7、14、28天后NSCs細胞核上P53蛋白均未見陽性表達。 5.實驗組、對照組及空白對照組共培養(yǎng)7、14、28天后的NSCs核型分析結(jié)果均為正常。 6.實驗組、對照組及空白對照組共培養(yǎng)7、14、28天后的NSCs接種裸鼠顱內(nèi)均未見腫瘤形成。 結(jié)論： 1.C6膠質(zhì)瘤細胞對體外共培養(yǎng)體系中的大鼠神經(jīng)干