阻斷共抑制信號途徑聯(lián)合趨化抗原基因修飾瘤苗治療腫瘤的研究.pdf

1、惡性腫瘤已成為我國死亡率最高的疾病，近年來發(fā)病率有顯著增高趨勢。除了三大常規(guī)療法，生物治療為攻克腫瘤帶來了新的希望。我們研究室經(jīng)多年研究，在國際上首創(chuàng)了高效趨化抗原基因疫苗系統(tǒng)，本研究在分析了基因疫苗存在問題的基礎(chǔ)上，應(yīng)用前列腺癌趨化抗原基因修飾瘤苗，并通過阻斷共抑制信號途徑進行免疫治療研究，分析抗腫瘤效應(yīng)及相關(guān)機制，從而建立更為有效的聯(lián)合免疫治療腫瘤的新方案。 聯(lián)合治療的策略是：將人前列腺特異膜抗原(hPSM)、小鼠前列腺酸性

2、磷酸酶(mPAP)和人的前列腺特異抗原(hPSA)融合，稱為3P抗原；以pcDNA3.1為載體，在3P的5’端連接次級淋巴組織趨化性因子(SLC)，而在其3’端連接人IgG的Fc基因，得到基因重表達質(zhì)粒pSLC-3P-Fc，即趨化抗原基因疫苗；以轉(zhuǎn)3P基因的B16F10細(xì)胞為前列腺癌小鼠模型：應(yīng)用pSLC-3P-Fc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染B16F10細(xì)胞(B16F10-SLC-3P-Fc)作為前列腺癌趨化抗原基因修飾瘤苗，同時聯(lián)合應(yīng)用anti-CTL

3、A-4或ami-B7-H1抗體進行免疫治療。 實驗結(jié)果顯示，基因修飾瘤苗能誘導(dǎo)較強的抗腫瘤免疫反應(yīng)，與anti-CTLA-4或anti-B7-H1抗體的聯(lián)合應(yīng)用可以進一步提高抗腫瘤免疫效應(yīng)，顯著地抑制腫瘤的生長同時延長荷瘤小鼠的生存期，并使大部分小鼠無瘤生存。CTL活性檢測表明經(jīng)免疫的小鼠脾細(xì)胞既可產(chǎn)生針對3P抗原特異性的CTL，也可產(chǎn)生針對野生型B16F10的細(xì)胞毒效應(yīng)。再攻擊實驗證明聯(lián)合免疫可誘導(dǎo)較強的免疫記憶。CD4<'+

4、>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞亞群的體內(nèi)刪除實驗說明，在聯(lián)合免疫治療效應(yīng)期CD8<'+>T細(xì)胞發(fā)揮主要的抗腫瘤作用。研究結(jié)果表明，趨化抗原基因修飾細(xì)胞瘤苗結(jié)合共抑制分子通路的阻斷作為聯(lián)合免疫的治療策略，可以增強免疫反應(yīng)，并提高長期免疫效應(yīng)。 此外，我們以TC-1腫瘤為模型，研究了anti-CTLA-4和anti-B7-H1兩種抗體聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤效應(yīng)，并初步探討了作用機制。研究結(jié)果表明，兩種抗體的聯(lián)合應(yīng)用可以產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)，提

5、高針對TC-1腫瘤細(xì)胞的免疫排斥，其中CD8<'+>T細(xì)胞在免疫反應(yīng)中發(fā)揮主要的抗腫瘤作用。 從PHA活化的健康中國人外周血淋巴細(xì)胞總RNA中，擴增人CTLA-4基因胞外區(qū)cDNA片段，將其與人免疫球蛋白IgG的Fc段重組連接，插入到pHIgV中，得到融合基因表達載體。應(yīng)用脂質(zhì)體方法轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞CHO-dhfr<'->，氨甲喋呤(MTX)進行篩選，得到可以表達融合蛋白hCTLA-4-Fc的CHO-dhfr<'->細(xì)胞，為CTLA