SAMP8小鼠在正中隆起Nestin、Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的:對(duì)比觀察SAMP8小鼠與SAMR1小鼠正中隆起Nestin、Sox2和BrdU陽(yáng)性細(xì)胞的形態(tài)和分布。
　　方法:SAMP8小鼠16只，清潔級(jí)，雌雄不限，體質(zhì)量26g±2g;SAMR1小鼠8只，清潔級(jí)，雌雄不限，體質(zhì)量31g±3g。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為兩組:①正常組（n SA8=8，n SAMR1=4）:不作任何處理;②模型組(n SAMP8=8，n SAMR1=4):腹腔注射BrdU生理鹽水溶液，連續(xù)三日，每日兩次，于每日的同

2、一時(shí)間注射，兩次注射時(shí)間間隔2小時(shí)。
　　1、標(biāo)本制備
　　1.1正常動(dòng)物標(biāo)本制備
　　用水合氯醛(0.3ml/100g)將正常組麻醉后，自主動(dòng)脈灌注4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，PH7.2)進(jìn)行前固定，立即取腦，后固定。將組織標(biāo)本隨機(jī)分組，一組（n SAMP8=4，n SAMR1=2）經(jīng)脫水，透明，包埋，選取含正中隆起部分，石蠟切片機(jī)冠狀面切片，厚度約為5μm，制成石蠟切片。另一組(n SAMP8=4

3、，n SAMR1=2)先后經(jīng)15％蔗糖溶液和30％蔗糖溶液脫水，選取含正中隆起部分，恒溫冰凍切片機(jī)冠狀面切片，厚度約為10μm，制成冰凍切片。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置符合動(dòng)物倫理學(xué)要求。
　　1.2 BrdU標(biāo)記動(dòng)物模型標(biāo)本取材
　　將模型組按照100mg/kg進(jìn)行腹腔注射BrdU生理鹽水溶液，連續(xù)三日，每日兩次，于每日的同一時(shí)間注射，兩次注射時(shí)間間隔2小時(shí)。第四日用水合氯醛(0.3ml/100g)將模型組麻醉后，自主動(dòng)脈灌注4％多

4、聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，PH7.2)進(jìn)行前固定，立即取腦，后固定。將組織標(biāo)本隨機(jī)分組，一組（n SAMP8=4，n SAMR1=2）經(jīng)脫水，透明，包埋，選取含正中隆起部分，石蠟切片機(jī)冠狀面切片，厚度約為5μm，制成石蠟切片。另一組（n SAMP8=4，n SAMR1=2）先后經(jīng)15％蔗糖溶液和30％蔗糖溶液脫水，選取含正中隆起部分，恒溫冰凍切片機(jī)冠狀面切片，厚度約為10μm，制成冰凍切片。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置符合動(dòng)物倫理學(xué)要

5、求。
　　2、染色
　　2.1免疫組織化學(xué)染色
　　將上述石蠟切片分別經(jīng)Nestin、Sox2和BrdU免疫組織化學(xué)染色，使用中性樹(shù)膠封片后Olympus BX-UCB觀察照相。
　　2.2免疫熒光雙標(biāo)染色
　　將上述冰凍切片分別經(jīng)Nestin+Sox2和BrdU+Sox2免疫熒光雙標(biāo)染色后，使用抗熒光衰減封片劑封固后Olympus BX-UCB觀察照相。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果中所示

6、陽(yáng)性細(xì)胞采用專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測(cè)定陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率。
　　結(jié)果:
　　1免疫組織化學(xué)結(jié)果觀察
　　1.1 Nestin
　　Nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞在ME處明顯表達(dá)，在ME室管膜帶、內(nèi)帶呈強(qiáng)陽(yáng)性分布，基突伸向外帶的血管壁周?chē)?。SAMP8(陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:45.01±3.46％)較SAMR1（陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:29.81±4.55％）陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)量多;SAMP8內(nèi)帶靠近外帶的一側(cè)

7、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較靠近室管膜帶的一側(cè)多;SAMR1內(nèi)帶靠近外帶的一側(cè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較靠近室管膜帶的一側(cè)少。
　　1.2 Sox2
　　Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞在ME室管膜帶單層整齊分布，中央部少，兩側(cè)部略多，染色較第三腦室室管膜Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞淺。Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞在ME內(nèi)帶少量分布。SAMR1（陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:46.40±2.98％）較SAMP8(陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:24.75±3.12％)陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)量多，且在SAMP8內(nèi)帶靠近

8、外帶的一側(cè)幾乎未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞分布，SAMR1可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞分布。ME外帶細(xì)胞稀疏，腹側(cè)可見(jiàn)多個(gè)較大的血管。
　　1.3 BrdU
　　BrdU陽(yáng)性細(xì)胞在ME內(nèi)帶零星分布，SAMP8(陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:4.31±0.27％)較SAMR1（陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率:2.16±0.10％）陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)量略多，SAMP8陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于內(nèi)帶靠近外帶的一側(cè)，SAMR1陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于內(nèi)帶靠近室管膜帶的一側(cè)，胞核較大，核內(nèi)染色不均勻，偶見(jiàn)成對(duì)的分裂

9、期的陽(yáng)性細(xì)胞。
　　2免疫熒光結(jié)果的觀察
　　2.1 Nestin、Sox2免疫熒光雙標(biāo)
　　在ME的內(nèi)帶可見(jiàn)少量Nestin、Sox2免疫熒光雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。
　　2.2 BrdU、Sox2免疫熒光雙標(biāo)
　　在ME的內(nèi)帶可見(jiàn)少量BrdU、Sox2免疫熒光雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1、Nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞于ME的室管膜帶、內(nèi)帶密集分布，其突起較長(zhǎng)，由背側(cè)向腹側(cè)走行，基突伸向外帶血

10、管旁。SAMP8較SAMR1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量多，內(nèi)帶靠近外帶側(cè)比內(nèi)帶靠近室管膜帶側(cè)表達(dá)強(qiáng)。
　　2、Sox2免疫陽(yáng)性細(xì)胞在ME室管膜帶密集分布，內(nèi)帶稀疏分布;SAMP8較SAMR1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量少，內(nèi)帶靠近室管膜帶側(cè)比內(nèi)帶靠近外帶側(cè)帶側(cè)表達(dá)強(qiáng)。
　　3、BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞在ME內(nèi)帶零星分布;SAMP8較SAMR1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量略多，內(nèi)帶靠近外帶側(cè)表達(dá)略強(qiáng)。
　　4、Nestin、Sox2免疫熒光雙標(biāo)細(xì)胞和BrdU、Sox2免