淋巴瘀滯對肝組織瘦素免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞結(jié)構(gòu)影響的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的:
　　 肝臟是人體內(nèi)最重要的器官之一,不僅在物質(zhì)代謝方面與全身各組織器官密切相關(guān),而且還具有分泌,排泄和生物轉(zhuǎn)化功能,特別是在脂肪代謝中,肝臟起著重要的作用。瘦素是1994年鑒定的由肥胖基因(ob基因)編碼的產(chǎn)物,有抑制食欲,減少能量攝取,增加能量消耗,抑制脂肪合成的作用,對脂肪的物質(zhì)代謝有著重要的調(diào)節(jié)作用。眾所周知,淋巴管道是一種單向引流管道系統(tǒng),主要從各器官或組織回收液體、脂肪和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì),肝臟可以產(chǎn)生大量淋巴

2、,胸導(dǎo)管的淋巴有近一半來自肝臟。了解肝組織瘦素的表達(dá),對脂肪代謝的調(diào)節(jié),以及肝內(nèi)淋巴管在肝臟的物質(zhì)代謝中的作用,具有重要的生理和病理意義。本實驗擬通過對正常SD大鼠和結(jié)扎胸導(dǎo)管模型動物肝組織免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,為探討肝臟和瘦素的關(guān)系,以及淋巴淤滯對肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響,提供形態(tài)學(xué)實驗證據(jù)。
　　 方法:
　　 1實驗動物與取材
　　 選用健康SD大鼠(由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)30只,雌雄不拘,體重

3、250～300g,隨機(jī)分為實驗(手術(shù)20只)組和對照(假手術(shù)10只)組;實驗前2個小時喂食脂類食物,經(jīng)6％水合氯醛(5m1/kg)腹腔注射麻醉下,于腹部行胸導(dǎo)管手術(shù)結(jié)扎,而對照組只充分游離胸導(dǎo)管而不結(jié)扎。術(shù)后的實驗動物,常規(guī)喂養(yǎng),術(shù)后六個月取材,用于光鏡和電鏡組織樣品的制備。
　　 2光鏡樣品制備與觀察
　　 肝臟石蠟包埋組織切片,行常規(guī)HE染色和光鏡觀察;以顯示肝臟細(xì)微結(jié)構(gòu),以及肝內(nèi)脈管系統(tǒng)的分布特點。
　　

4、3免疫組織化學(xué)染色與光鏡觀察
　　 對照和實驗組SD大鼠肝組織石蠟切片,行瘦素免疫組織化學(xué)染色,光鏡觀察瘦素及其受體免疫組織化學(xué)的結(jié)果,在肝組織內(nèi)各類細(xì)胞上的免疫反應(yīng)陽性表達(dá)。
　　 4透射電鏡樣品制備與觀察
　　 肝組織標(biāo)本行常規(guī)透射電鏡樣品制備,肝組織超薄切片,進(jìn)行透射電鏡觀察;以揭示SD大鼠肝組織的超微結(jié)構(gòu)特點,以及實驗性淋巴淤滯對肝組織超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1實驗手術(shù)中肉眼

5、觀察所見
　　 因術(shù)前給予實驗動物脂類食物喂養(yǎng),大量乳糜物質(zhì),進(jìn)入腸系膜淋巴管,使得腸系膜淋巴,腸干,胸導(dǎo)管均變成乳白色,容易觀察。在結(jié)扎部位下端,大量乳白色的乳糜物質(zhì)再此聚集,使得此部位的胸導(dǎo)管充盈、擴(kuò)張,管壁變薄、透亮,而結(jié)扎部位上端則沒有下端變化明顯。
　　 實驗中肉眼可見,假手術(shù)組SD大鼠的肝臟外形正常,呈暗紅色,被膜光滑;而在胸導(dǎo)管結(jié)扎的模型組動物,其肝臟的體積明顯增大,肝臟的邊緣變圓鈍,包膜緊張,表面無光澤。

6、
　　 2 HE染色切片光鏡觀察
　　 在對照組動物的HE組織切片,肝臟組織結(jié)構(gòu)完整,中央靜脈位于肝小葉的中央,肝板呈條索狀向中央靜脈匯聚,肝血竇位于肝索之間,肝板之間的空隙和肝血竇相互連接,肝細(xì)胞和肝血竇結(jié)構(gòu)較清晰。在肝組織切片的門管區(qū),可見三個主要管道,小葉間動脈、小葉間靜脈和小葉間膽管。
　　 實驗組SD大鼠術(shù)后6個月的肝組織,石蠟切片HE染色處理后,光鏡下觀察可見肝小葉中央靜脈形態(tài)不規(guī)則,管腔擴(kuò)張,內(nèi)皮多

7、出現(xiàn)斷裂,其附近肝血竇明顯增寬,肝索排列紊亂。在變形肝小葉的中央靜脈周圍,可見有些肝細(xì)胞出現(xiàn)大小不等的脂滴,而且,可見空泡樣的脂肪細(xì)胞明顯增多。
　　 3免疫組織化學(xué)染色光鏡觀察
　　 在正常對照組SD大鼠的肝組織內(nèi),出現(xiàn)均勻的瘦素免疫反應(yīng)陽性結(jié)果,呈棕褐色著色顆粒,在肝中央靜脈和肝門管區(qū)附近,陽性細(xì)胞的棕褐色免疫反應(yīng)有所增強(qiáng)。在實驗組SD大鼠,肝組織瘦素免疫反應(yīng)強(qiáng)陽性棕褐色顆粒,較對照組明顯增多;在肝中央靜脈和肝門管區(qū)

8、,強(qiáng)陽性反應(yīng)也相對較多;并且,在實驗組的脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞內(nèi)脂滴附近,也可見到瘦素免疫強(qiáng)陽性棕褐色著色反應(yīng)。模型組SD大鼠肝組織,出現(xiàn)瘦素陽性表達(dá)區(qū)域,和對照組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義的擴(kuò)大。
　　 4超薄組織切片透射電鏡觀察
　　 對照組SD大鼠肝組織透射電鏡觀察顯示,對照組SD大鼠肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)清楚,胞質(zhì)內(nèi)胞質(zhì)豐富電子密度較低,胞核呈圓形或橢圓型,核膜較薄,且連續(xù)完整。臨近肝血竇的竇周隙,可見少量的結(jié)締組織,在肝血竇和肝細(xì)胞之

9、間的竇周隙內(nèi),還可見細(xì)小的數(shù)量較多微絨毛,但無基底膜。兩個肝細(xì)胞之間的溝樣細(xì)胞間隙,構(gòu)成毛細(xì)膽管。在肝血竇的竇壁,可見扁平的內(nèi)皮細(xì)胞,還可見kupffer細(xì)胞,其體積較大,有胞質(zhì)突起且形態(tài)不規(guī)則,胞質(zhì)的大部分突入竇腔,小部分可依附于內(nèi)皮上,或穿過內(nèi)皮進(jìn)入竇腔內(nèi)。
　　 實驗組SD大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯改變,肝細(xì)胞核的核膜增厚,核膜孔增大,核內(nèi)染色質(zhì)聚集成一體,核內(nèi)基質(zhì)分布不均勻。肝細(xì)胞內(nèi)胞質(zhì)空曠,細(xì)胞基質(zhì)增多,電子密度降低,脂類物質(zhì)

10、沉積,似肝細(xì)胞水腫和脂肪變的表現(xiàn)。在竇周隙內(nèi),常可觀察到脂類物質(zhì)的沉積,結(jié)締組織的增多。在肝細(xì)胞之間,也可見到脂質(zhì)物質(zhì)的沉積,結(jié)締組織纖維的增多。偶見肝細(xì)胞的凋亡現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:
　　 1無論在生理還是病理情況下,SD大鼠肝細(xì)胞均呈現(xiàn)瘦素免疫反應(yīng)陽性,而且,淋巴淤滯使肝細(xì)胞瘦素表達(dá)增強(qiáng)。
　　 2肝臟的淋巴回流主要通過胸導(dǎo)管,在腹部手術(shù)結(jié)扎大鼠胸導(dǎo)管,可成功建立肝淋巴淤滯的實驗動物模型,而且,造模的成功率較高