不同年齡階段大鼠連合下器Sox2陽性細胞的形態(tài)學觀察.pdf

1、目的:觀察出生后不同年齡階段大鼠連合下器Sox2陽性細胞的分布和形態(tài)結構的變化。探討在連合下器中神經干細胞的增殖與分化，從而研究在連合下器中神經干細胞的功能和意義。
　　方法:雄性健康SD大鼠，選取4周齡、8周齡、16周齡、24周齡各6只，共24只。麻醉后，經心臟灌注4％多聚甲醛磷酸緩沖液(0.1 mol/L，pH7.2)。常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，切片后，用免疫組化法檢測連合下器處Sox2的表達。
　　1、標本制備:將不同年齡

2、階段組別SD大鼠以水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉，自升主動脈灌注4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液(0.1 mol/L，pH7.2)行前固定，立即取腦，后固定，經脫水，透明，包埋，選取含連合下器部分，石蠟切片機冠狀面切片，厚度約為5μm，制成石蠟切片。本次實驗對實驗動物的處置符合動物倫理學要求。
　　2、免疫組織化學染色:將上述標本取材中得到的石蠟切片經Sox2免疫組織化學染色，蘇木精復染后，中性樹膠封片，待干燥后使用OlympusB

3、X-UCB光學顯微鏡觀察并照相。
　　3、統(tǒng)計學處理:實驗結果中所示陽性細胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測定陽性細胞數，計算陽性率。經SPSS16.0統(tǒng)計學分析，以P＜0.05為具有顯著性差異。
　　結果:Sox2免疫組織化學染色后，切片在光學顯微鏡下觀察可以看到Sox2陽性細胞為胞核著色，連合下器與周圍邊界清晰，腹側為室管膜面，室管膜面上可見清晰的界線。室管膜面清晰界線的背側為無結構均質狀結構，無

4、陽性表達，均質狀結構的背側可以看到細胞層，細胞呈圓形或橢圓形，不同年齡階段連合下器區(qū)域陽性細胞形態(tài)、分布各異，排列致密。在連合下器背側邊緣處可見豐富血管分布，兩側部多于中央部，血管內皮細胞清晰明顯。在顯微鏡下通過測量得到:室管膜細胞大小約為3.5～6.5μm×7.5～10.5μm。
　　將顯微鏡下觀察得到的圖像保存，選取相同位置的橫斷面，同一倍數，相同面積，采用專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus6.0測定陽性細胞數，計算