大鼠不同部位穴位的形態(tài)學觀察.pdf

1、本文采用傳統(tǒng)組織學方法以及免疫組織化學方法，對大鼠典型的穴位和非穴位不同層次的皮膚結構進行了研究，觀察了這些穴位和非穴位之間，不同穴位之間的血管、神經(jīng)、纖維以及感受器的分布及數(shù)量的差別，以及穴位和非穴位在針刺和非針刺時對Cx43表達的差異，從不同角度觀察穴位的形態(tài)學結構。 方法 將20只雄性Wistar大鼠隨機分為兩組，一組為正常對照組，另一組為針刺組，每組十只。正常對照組大鼠不做任何處理，直接用空氣栓塞法處死，將腹腔內(nèi)

2、容物清除后，固定在10﹪福爾馬林溶液中，固定15天；對針刺組大鼠，選定特殊穴位，上肢為內(nèi)關穴、下肢為后三里即足三里穴、背部為大椎穴、腹部為關元穴、爪部為涌泉穴，以及除涌泉穴外其他穴位旁開1cm的非穴位處對以上部位施行手針針刺，每10分鐘行一次提插捻轉，頻率為1-2次/秒，留針30分鐘后，空氣栓塞處死，余步驟同正常對照組大鼠。將固定好的大鼠取出，對照組大鼠取穴位處及穴位旁開1cm處大小約0.5×0.5×0.5cm的組織塊，針刺組取穴位和非

3、穴位施行針刺處大小與對照組相等的組織塊，干冰快速冷凍，冰凍切片機切片，厚度為20μm。涌泉穴處于后肢爪底部，面積小，因此涌泉穴沒有取對應的對照組皮膚。將做好的切片分別采用H.E染色法、Masson三色染色法、Bielschowsky改良法以及一抗為Cx43的免疫組織化學等四種染色方法來進行染色。染色后，光學顯微鏡觀察，統(tǒng)計學分析，實驗結果皆以均數(shù)±標準差(-x±s)表示，采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，采用q檢驗。

4、 結果 1.穴位與非穴位之間的差異性比較 大鼠皮膚結構層次與組織胚胎學里描述的人的皮膚形態(tài)略有區(qū)別，由表皮、真皮和皮下組織構成。大部分皮膚有毛密布，有皮脂腺，局部有汗腺。鏡下可見其表皮很薄，大致可分為基底層、棘細胞層，顆粒層和角質(zhì)層，成年大鼠沒有透明層。腹部皮膚的復合毛囊較多，約占40﹪，而背部相對較少，約占20﹪。 對大鼠不同部位穴位和非穴位處組織冰凍切片，用H.E染色法，Masson三色染色法以及Biels

5、chowsky改良法染色后，觀察組織血管及其分支、神經(jīng)分支以及膠原纖維的分布，并計數(shù)，進行統(tǒng)計學分析。結果顯示，與非穴位組相比，足三里穴在血管分支、神經(jīng)分支及膠原纖維的數(shù)目上顯著性多于非穴位組，關元穴的神經(jīng)分支較非穴位組有較顯著差異，在血管分支及膠原纖維方面與非穴位組差異并不顯著；內(nèi)關穴、大椎穴位和非穴位的對照中，三者均無顯著差異，涌泉穴因取材問題，無相應對照組的數(shù)據(jù)。 2.不同部位穴位間的差異性 對大鼠不同部位穴位和非

6、穴位作組織冰凍切片，用H.E染色法，Masson三色染色法以及Bielschowsky改良法染色后，光鏡下觀察血管及其分支、神經(jīng)分支以及彈性纖維的分布，并計數(shù)，進行統(tǒng)計學分析。以大鼠足三里穴作為基本的對照穴位，其他各組穴位分別與足三里穴位組進行比較。得出，內(nèi)關穴與足三里穴比較，在血管及分支方面，無顯著性差異；關元、大椎則顯著性減少，而涌泉顯著性增多；在神經(jīng)纖維及分支方面，內(nèi)關、關元、大椎較足三里數(shù)目顯著性減少；而涌泉則顯著性增多；在膠原

7、纖維數(shù)量上，內(nèi)關、關元、大椎與足三里無明顯差異性，而涌泉穴則膠原纖維的表達豐富，較足三里有明顯差異。 另外在局部視野里，感受器數(shù)目比較少，有些感受器在一個視野內(nèi)不可見到，難以統(tǒng)計，因此僅做了肉眼的粗略估算和比較，得出不同穴位間感受器的類型和數(shù)目有一定區(qū)別，在皮膚的層次里，足三里和內(nèi)關以游離神經(jīng)末梢為主，偶見觸覺小體和麥氏小體，而在關元和大椎穴區(qū)則以毛囊感受器和游離神經(jīng)末梢為主，涌泉穴則以環(huán)層小體，觸覺小體和大量豐富的末梢神經(jīng)為多

8、見，偶見露菲尼小體，在這些穴位的皮膚層次中未觀察到克勞終球。 3.Cx43在穴位和非穴位間表達的差別以及同一穴位針刺組和非針刺組的異同 免疫組織化學的染色結果顯示，大鼠皮膚中Cx43主要表達在上皮細胞胞漿、胞膜上，包括皮膚表皮和部分毛囊等上皮角質(zhì)的形成細胞，且在表皮基底層、棘細胞層中表達較多、角質(zhì)層中表達較少。根據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計，①非針刺組與針刺組中，與非穴位處比較，穴位處對Cx43表達的面積明顯增多，兩者相比有非常顯著性差異

9、；②穴位組和非穴位組中，與非針刺組相比，針刺組中Cx43的表達普遍增加，其中穴位針刺組與穴位非針刺組相比，各穴位對Cx43的表達增加，兩者有顯著性差異；非穴位針刺組較非穴位非針刺組相比，各部位對Cx43的表達也增加，其中，大椎穴相應對照區(qū)針刺與非針刺組為顯著性差異，而足三里、內(nèi)關、關元為非常顯著性差異。③與非穴位組比較，在足三里、關元上，針刺組較非針刺組表達Cx43增加量的幅度要高于相對應的非穴位組，兩者有顯著性差異；在大椎穴，兩者相較