大鼠右心耳結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其與心房肽釋放和轉(zhuǎn)運(yùn)關(guān)系的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的：免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究指出，心肌細(xì)胞可合成和分泌心房尿鈉多肽簡稱心房肽（atrial natriuretic polypeptide，ANP）；而且，在右心耳的心房肌細(xì)胞內(nèi)，心房肽顆粒（ANP granules）數(shù)量最多。放射免疫分析表明，心包腔的心包液中含有心房肽，并且呈現(xiàn)生理或病理情況下的含量變化。對于心包液中心房肽的來源和去向，尚缺乏形態(tài)學(xué)方面的證據(jù)；關(guān)于心房肽的釋放形式和正常轉(zhuǎn)運(yùn)途徑，目前仍不十分清楚。本研究通過對

2、大鼠右心耳組織標(biāo)本進(jìn)行光鏡和電鏡觀察，揭示右心耳的細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，探討右心耳心房肌與心房腔和心包腔的關(guān)系，為心房肽分泌顆粒的釋放形式和正常轉(zhuǎn)運(yùn)途徑，提供形態(tài)學(xué)方面的依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與取材：選用健康成年雄性SD大鼠10只，腹腔注射戊巴比妥鈉溶液深度麻醉下，處死動(dòng)物后取右心耳，用于光鏡和電鏡組織樣品的制備。
　　 2.光鏡樣品制備與觀察：右心耳石蠟包埋組織切片，行蘇木精-伊紅（haemat

3、oxylin-eosin，HE）染色和光鏡（light microscope，LM）觀察；右心耳冰凍組織切片，行5'-核苷酸酶-堿性磷酸酶（5'-Nase-AL Pase）酶組織化學(xué)雙重染色和光鏡觀察。顯示右心耳的細(xì)微組織結(jié)構(gòu)，心內(nèi)膜、心肌層和心外膜的排列，以及右心耳內(nèi)脈管系統(tǒng)的分布特點(diǎn)。
　　 3.透射電鏡樣品制備與觀察：常規(guī)電鏡樣品制備，右心耳超薄組織切片，行透射電鏡（transmission electron micros

4、cope，TEM）觀察。揭示右心耳組織的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，觀察心房顆粒分布特征；辨別心房肌細(xì)胞間毛細(xì)血管和毛細(xì)淋巴管類型及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　 4.掃描電鏡樣品制備與觀察：常規(guī)掃描電鏡樣品制備，應(yīng)用掃描電鏡（scanning electron microscope，SEM）觀察心外膜表面和心內(nèi)膜腔面的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；對二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）冷凍割斷法制備的樣品，應(yīng)用掃描電鏡觀察右心耳組織內(nèi)部割斷面的結(jié)構(gòu)特

5、點(diǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.光鏡觀察顯示：
　　 （1）在HE染色的石蠟包埋組織切片上，心外膜由薄層結(jié)締組織和外覆一層上皮（間皮）細(xì)胞構(gòu)成，結(jié)締組織隨部位的不同厚薄不一，可見大量的血管和淋巴管。心外膜下方為心肌膜，可見環(huán)形和縱行排列的心?。?xì)胞）纖維互聯(lián)成網(wǎng)，網(wǎng)孔中含豐富的毛細(xì)血管。心內(nèi)膜位于最內(nèi)層，由扁平的內(nèi)皮細(xì)胞和心內(nèi)膜下層的結(jié)締組織構(gòu)成。
　　 （2）酶組織化學(xué)雙重染色組織切片的光鏡觀察表明，右心

6、耳的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與HE染色切片相似，淋巴管呈現(xiàn)棕色5'-Nase陽性反應(yīng)，管壁較薄，管腔較大而且不規(guī)則；血管則呈現(xiàn)藍(lán)染ALP陽性反應(yīng)，管壁較厚，管腔較小多呈圓形。
　　 2.透射電鏡觀察顯示：
　　 （1）大鼠右心耳的心外膜上皮和心內(nèi)膜內(nèi)皮，均由扁平細(xì)胞構(gòu)成；上皮細(xì)胞間的連接較松散，有許多短粗的指狀突起即微絨毛，突向心包腔面和基底面。內(nèi)皮細(xì)胞之間的連接較緊密，細(xì)胞上微絨毛短小而稀疏。上皮下和內(nèi)皮下均為疏松的結(jié)締組織，主要成分

7、為規(guī)律排列的膠原纖維束，還可見成纖維細(xì)胞、神經(jīng)、血管、淋巴管等。
　　 （2）在心房肌細(xì)胞的縱切面上，可見肌小節(jié)和許多線粒體：在肌細(xì)胞核的周圍，可見高爾基復(fù)合體和大量的分泌顆粒；分泌顆粒多為圓形或橢圓形，直徑約為100～300nm；電子密度高，呈均質(zhì)狀，并有界膜包裹；在心房肌靠近組織間隙的細(xì)胞膜處，也分布有大量形態(tài)類似的的分泌顆粒；分泌顆粒被細(xì)胞膜和少量胞漿包裹形成乳頭狀突起，類似鋸齒狀結(jié)構(gòu)，還可見到排空后的殘留空泡。在心肌細(xì)胞

8、間隙中，可見排出的由界膜包裹的心房顆粒，或被吞噬細(xì)胞攜帶。
　　 （3）右心耳心房肌之間的毛細(xì)血管為連續(xù)型，內(nèi)皮較厚無窗孔，腔內(nèi)常見紅細(xì)胞。在心房肌細(xì)胞之間，還可觀察到毛細(xì)淋巴管，其內(nèi)皮細(xì)胞之間的連接較松散，屬于重疊連接、嵌合連接、端端連接等開放性連接形式；毛細(xì)淋巴管的管壁較薄，管腔較大且不規(guī)則，腔內(nèi)為均質(zhì)樣物質(zhì)。在右心耳心房肌細(xì)胞外，于血管周隙、淋巴管周隙和結(jié)締組織間隙內(nèi)，常可見到形態(tài)大小與心肌細(xì)胞內(nèi)極為相似的、完整的膜包分泌

9、顆粒。
　　 3.掃描電鏡觀察顯示：
　　 （1）大鼠心外膜表面被覆扁平上皮，上皮細(xì)胞為多邊形，邊緣呈波浪狀互相嵌合，含核的部分略隆起；上皮細(xì)胞表面有微絨毛，在相臨細(xì)胞交界處，微絨毛較長、較多，尚存在上皮孔樣結(jié)構(gòu)。
　　 （2）心內(nèi)膜表面較光滑，內(nèi)皮細(xì)胞上微絨毛短小而稀疏：可見心最小靜脈的開口，孔徑約為10～20μm。
　　 （3）在右心耳冷凍割斷面上，上皮下和內(nèi)皮下的膠原纖維呈束狀，交織形成網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)。