糖尿病時(shí)正中隆起室管膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的：觀察糖尿病時(shí)不同時(shí)期正中隆起(ME)的室管膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，探討該室周器官在糖尿病發(fā)病過(guò)程中的作用。
　　 方法：選擇雄性健康Wistar大鼠，體重200-220g，制備糖尿病模型。正常對(duì)照組(n=15)；模型組分為四組：用藥2周組(n=15)：用藥4周組(n=15)；用藥8周組(n=15)；用藥11周組(n=15)。
　　 1.糖尿病模型制備：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)腹腔一次

2、性注射，60mg/kg，制備糖尿病模型。
　　 2.光鏡標(biāo)本制備：常規(guī)經(jīng)心灌注、固定、取腦，冠狀方向去除視交叉以前和漏斗柄以后的部分，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)石蠟切片，片厚5um。常規(guī)HE染色、NF-KB免疫組化染色、封片。顯微鏡觀察、照相。
　　 3.掃描電鏡標(biāo)本的制備：麻醉、灌注方法同光鏡標(biāo)本制備，但灌注液為含2％多聚甲醛和2.5％戊二醛的混合磷酸緩沖液。灌注完畢取材，取下含有ME的腦塊用PBS沖洗，置于磷酸緩沖液中。梯度

3、酒精脫水，叔丁醇置換，真空干燥、噴金，日立S-3500N觀察、照相。
　　 4.透射電鏡制備：透射電鏡樣品制備與掃描電鏡樣品制備相同，取下ME，放入4％戊二醛固定，1％餓酸后固定，樹(shù)脂包埋，切片，T-S7500透射電鏡觀察、照相。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：NF-KB陽(yáng)性細(xì)胞采用麥克奧迪數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0)測(cè)定平均光密度。數(shù)據(jù)用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（（x）±s）表示。應(yīng)用SNK-q檢驗(yàn)，進(jìn)行兩兩比較，以

4、P＜0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠在注射STZ后，第五天血糖值升高至30.0±1.34mmol/L，與對(duì)照組大鼠相比明顯升高(P＜0.05)，提示糖尿病動(dòng)物模型制備成功。
　　 2.光鏡觀察結(jié)果：
　　 2.1 正常對(duì)照組：ME室管膜細(xì)胞呈單層排列，胞核大小不一，呈圓形或橢圓形，ME內(nèi)有豐富的毛細(xì)血管。
　　 2.2 模型組：用藥2周組，正中隆起處的室管膜細(xì)胞體排列密集，胞

5、核萎縮，柵狀帶毛細(xì)血管稀疏；用藥4周組，正中隆起中間部室管膜細(xì)胞排列密集，靠近第三腦室側(cè)壁排列稀疏，柵狀帶毛細(xì)血管稀疏程度與糖尿病2周組無(wú)明顯改變；用藥8周組，正中隆起處室管膜細(xì)胞明顯增多，呈多層排列，靠近第三腦室側(cè)壁細(xì)胞增多明顯；用藥11周組，正中隆起處的室管膜細(xì)胞數(shù)目較八周組有所減少，細(xì)胞排列不規(guī)則，柵狀帶毛細(xì)血管稀疏程度與糖尿病2周組無(wú)明顯改變，第三腦室側(cè)壁細(xì)胞排列仍比較密集。
　　 3.掃描電鏡觀察結(jié)果：
　　

6、3.1 正常對(duì)照組：正中隆起處的分泌顆粒有明顯的區(qū)域性，大小均勻，表面光滑，直徑0.2-3.0μm。
　　 3.2 模型組：正中隆起處的分泌顆粒分布區(qū)域、大小出現(xiàn)明顯變化。2周組，分泌顆粒大小、分布均勻，顆粒不飽滿(mǎn)，在交界區(qū)可見(jiàn)多個(gè)形態(tài)不一的吞噬細(xì)胞樣室管膜上細(xì)胞。有的細(xì)胞表面有皺褶，有的細(xì)胞表面可見(jiàn)大量的分泌顆粒。4周組，分泌顆粒減少，漏斗隱窩處可見(jiàn)較小的分泌顆粒聚集成團(tuán)狀。8周組，靠近第三腦室側(cè)壁交界區(qū)可見(jiàn)大量的分泌顆粒，大

7、小不等，形態(tài)不一，也可見(jiàn)少量室管膜上細(xì)胞。11周組，分泌顆粒明顯減少，集中在正中隆起中間部，呈窄長(zhǎng)帶狀分布?？拷唤鐓^(qū)可見(jiàn)叢密的微絨毛。
　　 4.透射電鏡觀察結(jié)果：
　　 4.1 正常對(duì)照組：室管膜細(xì)胞間緊密連接，細(xì)胞核形態(tài)多樣，呈圓形、卵圓形或長(zhǎng)條形。在室管膜細(xì)胞的腦室面可見(jiàn)處于不同狀態(tài)的分泌顆粒，內(nèi)容物為大小不等的空心囊泡和實(shí)心顆粒。
　　 4.2 模型組：室管膜細(xì)胞分泌顆粒稀疏、變小，形態(tài)多樣，多呈圓形、

8、卵圓形；分泌顆粒內(nèi)有的可見(jiàn)致密核心，有的可見(jiàn)較小的點(diǎn)狀顆粒，有的可見(jiàn)稀少的小囊泡；室管膜細(xì)胞腦室面微絨毛稀疏，室管膜細(xì)胞內(nèi)線粒體呈圓形、卵圓形，線粒體嵴模糊不清。
　　 5.NF- KB免疫組織化學(xué)染色結(jié)果觀察
　　 5.1 正常對(duì)照組：正中隆起室管膜層可見(jiàn)少量的NF-κB表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞呈棕黃色，呈桿狀、橢圓形，平均光密度測(cè)定166.25±5.50。
　　 5.2 模型組：2周組，正中隆起部位可見(jiàn)NF-κB免

9、疫陽(yáng)性細(xì)胞排列密集，并且免疫陽(yáng)性細(xì)胞顏色加深，平均光密度測(cè)定185.77±6.02。4周組，免疫陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于室管膜層，平均光密度測(cè)定175.06±5.43。8周組，正中隆起處NF-κB免疫陽(yáng)性細(xì)胞彌散分布，平均光密度測(cè)定176.32±7.22。11周組與正常組比較無(wú)明顯差異，平均光密度測(cè)定167.13±5.38。
　　 結(jié)論：
　　 1.在掃描電鏡下首次觀察到正中隆起室管膜細(xì)胞的分泌顆粒在糖尿病大鼠的發(fā)病過(guò)程中有明