含紅、黃芪益氣養(yǎng)血湯對SAMP8小鼠免疫功能影響研究.pdf

1、1.含紅、黃芪益氣養(yǎng)血湯含藥血清對SAMP8小鼠脾淋巴細胞免疫功能影響研究
　　目的：以含紅芪和含黃芪的益氣養(yǎng)血湯及等體積生理鹽水分別灌胃青齡小鼠后制備含藥血清，將含藥血清與SAMP8小鼠脾臟淋巴細胞共培養(yǎng)，檢測含藥血清對SAMP8小鼠脾淋巴細胞體外增殖能力，培養(yǎng)上清液中細胞因子含量，T淋巴細胞亞群以及脾淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA和蛋白的表達的影響，以比較含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯含藥血清對SAMP8小鼠脾臟淋巴細胞免疫功能影響并探討

2、相關(guān)機制。
　　方法：取清潔級昆明種青齡小鼠30只，雌雄各半，隨機分為3組，每組10只，分別以含紅芪的益氣養(yǎng)血湯，含黃芪的益氣養(yǎng)血湯每日6g·Kg-1劑量以及等體積的生理鹽水灌胃，每日1次，連續(xù)灌胃14次，末次灌胃兩小時后眼球摘除取血，制備含藥血清。益氣養(yǎng)血紅芪組、益氣養(yǎng)血黃芪組及空白血清組分別按照最佳含藥血清培養(yǎng)濃度和時間與SAMP8小鼠脾臟淋巴細胞共培養(yǎng)，青齡鼠組和SAMP8組以含10％胎牛血清的完全培養(yǎng)液分別與青齡小鼠脾淋巴

3、細胞及SAMP8小鼠脾淋巴細胞共培養(yǎng)。以MTT法檢測各組淋巴細胞在ConA誘導下的體外增殖能力，以流式細胞術(shù)檢測各組T淋巴細胞亞群分化，ELISA測定細胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ的含量，實時熒光定量PCR檢測各組淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA的表達量，Western-Blot檢測各組淋巴細胞內(nèi)p38蛋白含量。
　　結(jié)果：與青齡鼠組相比較SAMP8組脾淋巴細胞體外增殖能力明顯降低；T淋巴細胞中CD8+T細胞百分比明顯降低，CD4

4、+T細胞百分比及CD4+/CD8+明顯升高，CD152+T細胞百分比也明顯升高；細胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ的含量減少；脾淋巴細胞中p38 mRNA及蛋白的表達減少，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。與空白血清組相比給藥組脾淋巴細胞體外增殖能力明顯增強；T淋巴細胞中CD152+T細胞百分比也明顯降低；細胞培養(yǎng)上清液中IL-2和IFN-γ的含量增多；脾淋巴細胞中p38 mRNA及蛋白的表達升高，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。與益氣養(yǎng)血

5、黃芪組相比紅芪組淋巴細胞增殖能力較強；T淋巴細胞中CD152+T細胞百分比較低；培養(yǎng)上清液中IL-2含量較多；淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA表達較高，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：含紅芪和含黃芪的益氣養(yǎng)血湯含藥血清均能促進SAMP8小鼠脾臟淋巴細胞體外增殖，影響T細胞亞群分化，增加IL-2和IFN-γ的分泌，提高淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA及蛋白的表達，改善衰老小鼠免疫功能，且在提高增殖能力、促進IL-2分泌及提高p38mR

6、NA的表達量方面紅芪組優(yōu)于黃芪組。
　　2.含紅、黃芪益氣養(yǎng)血湯對SAMP8小鼠免疫功能影響研究
　　目的：以含紅芪和含黃芪的益氣養(yǎng)血湯、胸腺肽及等體積生理鹽水分別灌胃SAMP8小鼠和青齡小鼠后取血及脾臟，檢測含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯對SAMP8小鼠血清中細胞因子含量，脾臟T淋巴細胞亞群以及脾淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA和蛋白表達的影響，以比較含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯對SAMP8小鼠免疫功能的影響并探討相關(guān)機制。
　　方法：

7、取昆明種青齡小鼠10只為青齡鼠組，SAMP8小鼠40只隨機分為4組：胸腺肽組、生理鹽水組、益氣養(yǎng)血紅芪組和益氣養(yǎng)血黃芪組。分別以生理鹽水，胸腺肽每日4.6mg?Kg-1，含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯每日6g?Kg-1劑量灌胃小鼠，每日1次，連續(xù)灌胃14次，末次灌胃后兩小時眼球摘除取血及脾臟，制成血清和脾淋巴細胞懸液。ELISA檢測其血清IL-2、IFN-γ含量，流式細胞術(shù)檢測其脾臟淋巴細胞表面CD3、CD4、CD8、CD28及CD152分子的

8、表達情況，實時熒光定量PCR檢測其p38 mRNA的表達情況，Western-Blot及免疫組化法檢測其p38蛋白表達。
　　結(jié)果：與青齡鼠組比較生理鹽水組SAMP8小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量降低；脾臟T淋巴細胞中CD8+T細胞和CD28+T細胞百分比降低，CD4+T細胞百分比增高，CD152+T細胞百分比增高；脾淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA及蛋白表達降低，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。與生理鹽水組相比胸腺肽組及中藥組均能提

9、高SAMP8小鼠血清中IL-2、IFN-γ含量，胸腺肽組含量高于中藥組，紅芪組IL-2含量高于黃芪組；胸腺肽組及中藥組均能提高T淋巴細胞中CD28+T細胞百分比，降低CD152+T細胞百分比，胸腺肽組及黃芪組CD152+T細胞百分比低于紅芪組；中藥組能提高SAMP8小鼠T淋巴細胞中CD8+T細胞百分比，且黃芪組CD8+T細胞百分比高于紅芪組；胸腺肽組及黃芪組能降低CD4+T細胞百分比；胸腺肽組及中藥組均能提高p38 mRNA表達，且胸腺

10、肽組mRNA表達高于中藥組，黃芪組高于紅芪組；胸腺肽組及中藥組均能提高p38蛋白含量及蛋白陽性率，且胸腺肽組優(yōu)于中藥組，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：含紅、黃芪的益氣養(yǎng)血湯均能通過提高SAMP8小鼠血清中IL-2和IFN-γ含量，影響脾臟T細胞亞群分化，增加脾淋巴細胞內(nèi)p38 mRNA及蛋白表達，改善SAMP8小鼠的免疫功能，且在提高CD8+T細胞百分比方面益氣養(yǎng)血湯復方作用優(yōu)于胸腺肽，在提高血清中IL-2含量方面紅芪