川芎及小續(xù)命湯有效成分在大鼠體內(nèi)的代謝研究.pdf

1、中藥及其復(fù)方是中華民族的瑰寶，是我國研發(fā)自主創(chuàng)新性新藥的重要源泉。中藥復(fù)方藥代動(dòng)力學(xué)的研究有助于揭示復(fù)方藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，對中藥的現(xiàn)代化及國際化具有重要意義。本論文選用川芎單味藥材和復(fù)方小續(xù)命湯作為研究對象，對大鼠口服中藥提取物和單體成分后單體成分在大鼠體內(nèi)代謝特征及大鼠口服中藥復(fù)方總提物和有效成分組后某些有效成分的藥代動(dòng)力學(xué)差異進(jìn)行探索研究，為中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究提供參考和思路。 川芎是著名的傳統(tǒng)中草藥之一，始載于《神農(nóng)

2、本草經(jīng)》，主治血淤氣滯所致月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，肝郁氣滯而致血行不暢的胸脅疼痛，頭痛，風(fēng)寒濕痹，跌打腫痛等疾病。本論文比較了大鼠分別口服川芎揮發(fā)油及其中主要成分藁本內(nèi)酯后的藁本內(nèi)酯在大鼠體內(nèi)代謝特征區(qū)別，對藁本內(nèi)酯主要的代謝產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，并探索研究了揮發(fā)油對不同亞型CYP450酶的抑制作用。 本論文建立了反相高效液相色譜法對大鼠分別口服川芎揮發(fā)油及藁本內(nèi)酯后尿、糞、膽汁中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析。色譜條件為：Phenomenex

3、C18(4.6×250 mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1％冰醋酸水溶液梯度洗脫，流速0.8 mL/min，檢測器為二極管陣列檢測器(DAD)，全波長掃描，檢測波長280mm，柱溫為25℃。結(jié)果表明大鼠分別口服揮發(fā)油和單體藁本內(nèi)酯后藁本內(nèi)酯在大鼠體內(nèi)主要以代謝產(chǎn)物形式從尿中排出，糞中含少量代謝產(chǎn)物，尿和糞中均未檢測到原藥。膽汁中代謝產(chǎn)物較少，原藥的含量很高。但是值得注意的是大鼠口服揮發(fā)油后藁本內(nèi)酯的代謝產(chǎn)物在數(shù)量及相對含量上均與

4、口服藁本內(nèi)酯單體具有較大差異，說明揮發(fā)油中其他成分對主要成分藁本內(nèi)酯的代謝可能產(chǎn)生了一定的影響。 從大鼠尿中檢測到7個(gè)代謝物，分離得到6個(gè)代謝物，根據(jù)NMR、MS和MS/MS數(shù)據(jù)鑒定出其中4個(gè)代謝物的結(jié)構(gòu)，分別為川芎內(nèi)酯I(senkyunolide I)，3，5-二羥基-3-丁基苯酞(3，5-dihydroxy-3-butylphthalide)，6-羥基-7-巰甲基藁本內(nèi)酯(6-hydroxy-7-sulfmethyl lig

5、ustilide)，川芎內(nèi)酯C(senkyunolide C)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為藁本內(nèi)酯藥代研究和臨床應(yīng)用提供重要參考數(shù)據(jù)。 本論文研究了揮發(fā)油對CYP4501A2，2C9，2C19，2D6，2E1，3A4等酶的體外抑制作用，根據(jù)推算結(jié)果揮發(fā)油對CYP4501A2，2C9，2C19，2D6，2E1，3A4等酶的IC50均遠(yuǎn)大于10μM，表明無抑制作用，為臨床安全聯(lián)合用藥提供一定的理論依據(jù)。 對于小續(xù)命湯的藥代特性研究，建立了H

6、PLC-MS方法測定大鼠分別口服小續(xù)命湯有效成分組和小續(xù)命湯總提物后5-O-甲基維斯阿米醇和升麻素在大鼠血漿中的濃度。樣品前處理采用乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取，內(nèi)標(biāo)選用非那西丁，色譜柱：InertsilODS-3(2.1 mmx100mm，3μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.1％甲酸水溶液體系(30:70，VN)，流速為0.2 mL/min，柱溫：30℃；線性離子阱質(zhì)譜儀，ESI離子源，采用全掃描正離子監(jiān)測模式，監(jiān)測的質(zhì)量數(shù)5-O-甲基維斯阿米醇為

7、m/z 290.5-291.5；升麻素為m/z 306.5-307.5；內(nèi)標(biāo)非那西丁為m/z 179.5-180.5-5-O-甲基維斯阿米醇和升麻素在血漿中線性范圍分別為11.5-230.0 ng/mL(r>0.99)、10.4-936.0 ng/mL(r>0.99)。日間精密度和日內(nèi)精密度RSD均小于10.7％。根據(jù)5-O-甲基維斯阿米醇和升麻素在血漿中的藥時(shí)曲線結(jié)果表明大鼠口服小續(xù)命湯有效成分組后5.O.甲基維斯阿米醇的達(dá)峰速度要慢

8、于口服總提物(Lmax(min)：480 versus 360；Cmax(ng/mL：338.03versus 318.46)。而口服小續(xù)命湯有效成分組后升麻素達(dá)峰速度快于口服總提物(Tmax(min)：180 versus 420：Cmax(ng/mL)：2018.33 versus 1625.73)。結(jié)果表明總提物中非有效成分對有效成分組的藥代動(dòng)力學(xué)具有一定影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為更深入研究小續(xù)命湯在大鼠體內(nèi)的藥代特性提供科學(xué)數(shù)據(jù)，并為傳統(tǒng)