天然結(jié)合雌激素的純化精制工藝研究和指紋圖譜分析.pdf

1、目的：利用一種精細分離填料MCI GEL CHP20P對孕馬尿中獲取的結(jié)合雌激素提取物進行分離純化，在提高總結(jié)合雌激素純度的同時，保留FDA規(guī)定的所有特征共有峰。 方法：(1)考察3種MCI GEL的靜態(tài)吸附量，篩選MCI GEL 系列精細分離填料。(2)考察MCI GEL CHP20P對結(jié)合雌激素提取物的動態(tài)飽和吸附量。(3)考察純化工藝中洗脫溶劑的濃度。(4)根據(jù)動態(tài)飽和吸附量和洗脫溶劑濃度結(jié)果，以結(jié)合雌激素的純度和收率為指

2、標，通過單因素試驗，正交試驗確定MCI GEL CHP20P分離純化結(jié)合雌激素提取物的吸附和洗脫條件。(5)純化工藝確定后，進行最佳工藝的重復驗證試驗及MCI GEL CHP20P穩(wěn)定性試驗。(6)對純化工藝重復驗證試驗所得的8批結(jié)合雌激素精制物進行HPLC指紋圖譜的分析，并利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件2004版》對指紋圖譜進行相似度評價，同時分析結(jié)合雌激素精制物中FDA規(guī)定的21個共有峰的保留情況。(7)對純化工藝重復驗證

3、試驗所得的8批結(jié)合雌激素精制物進行GC指紋圖譜的分析，并利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件2004版》對指紋圖譜進行相似度評價，同時分析結(jié)合雌激素精制物中FDA規(guī)定的20個共有峰的保留情況。 結(jié)果：(1)MCI GEL CHP20P對結(jié)合雌激素提取物的靜態(tài)吸附量最大，為104.9mg·mL<'-1>(干體積)，選擇該分離填料用于結(jié)合雌激素提取物的純化精制。(2)MCI GEL CHP20P 對結(jié)合雌激素提取物的動態(tài)飽和吸附

4、量為90mg·mL<'-1>(濕體積)。(3)FDA規(guī)定的除十種結(jié)合雌激素外的其它有效成分的最佳洗脫溶劑為水溶液，十種結(jié)合雌激素的最佳洗脫溶劑為10％甲醇水溶液。純化工藝確定最佳洗脫溶劑為水及10％甲醇溶液。(4)MCI GEK CHP20P分離純化結(jié)合雌激素提取物的最佳吸附和洗脫條件為：徑高比為1/8；上樣量為45mg·mL<'-1>濕樹脂體積；上樣液濃度為0.16g·mL<'-1>；洗脫溶劑用量/CE精制物量為45mL·g<'-1>

5、水以及450mL·g<'-1>的10％甲醇水溶液；沈脫溶劑不需調(diào)節(jié)pH值。(5)最佳純化工藝條件下，MCI GELCHP20P對結(jié)合雌激素提耿物吸附及解吸附穩(wěn)定，且可以重復使用8-9次后經(jīng)過再生；十種結(jié)合雌激素的純度明顯提高，收率均在90％以上；另外，結(jié)合雌激素提取物經(jīng)過純化精制后，所得的結(jié)合雌激素精制物異味去除且色澤變淡。(6)8次重復驗證試驗所得的結(jié)合雌激素精制物HPLC指紋圖譜之間的數(shù)學相似度較高；且21個特征峰參數(shù)與FDA提供參

6、數(shù)一致或接近。(7)8次重復驗證試驗所得的結(jié)合雌激素精制物GC指紋圖譜之間的數(shù)學相似度較高：且20個特征峰參數(shù)與FDA提供參數(shù)一致或接近。 結(jié)論：MCI GEL CHP20P對結(jié)合雌激素提取物具有良好的靜態(tài)及動態(tài)吸附性能，流出液達到12倍柱體積時才開始出現(xiàn)泄漏，并較長時間保持低濃度泄漏，當流出液體積達到15倍柱體積時達到吸附平衡，此時MCI GEL CHP20P對結(jié)合雌激素提取物的動態(tài)飽和吸附量約為90mg·mL<'-1>(濕體