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1、實(shí)驗(yàn)的目的是要根據(jù)國(guó)際上關(guān)于中草藥的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)建立一套中藥龍膽分子生物學(xué)及生物化學(xué)的指紋圖譜檢測(cè)技術(shù).實(shí)驗(yàn)通過研究RAPD及ISSR反應(yīng)體系中的一些因素對(duì)反應(yīng)的影響,優(yōu)化RAPD及ISSR的PCR反應(yīng),建立了適用于龍膽的RAPD及ISSR分子標(biāo)記方法.并用這2種分子標(biāo)記方法對(duì)4種正品龍膽的43個(gè)樣品進(jìn)行了DNA指紋分析.實(shí)驗(yàn)用改進(jìn)的SDS法提取的龍膽總DNA為模板進(jìn)行RAPD及ISSR的PCR擴(kuò)增,對(duì)產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析
2、.從100個(gè)RAPD引物和32個(gè)ISSR引物中分別篩選出9個(gè)RAPD引物和4個(gè)ISSR引物可用于遺傳多樣性分析.通過距離系數(shù)UPGMA聚類法分析電泳產(chǎn)物,構(gòu)建類聚關(guān)系樹狀圖.結(jié)果顯示堅(jiān)龍膽與三花龍膽、龍膽、條葉龍膽的遺傳距離較遠(yuǎn),而三花龍膽、龍膽、條葉龍膽三種中三花龍膽和龍膽親緣關(guān)系較近.而且在4個(gè)品種的內(nèi)部也可見豐富的遺傳多樣性.在藥物有效成分含量分析方面,首先建立高效毛細(xì)管電泳法測(cè)定生藥龍膽中有效成分龍膽苦苷含量的新方法.實(shí)驗(yàn)采用高
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