α-MSH對LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細胞CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達的影響.pdf

1、　　目的：CD14和TLR4(Toll-like receptor 4)是LPS(Lipopolysaccharide)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中至關(guān)重要的受體。細胞因子信號抑制劑(suppressors of cytokine signaling,SOCS)具有負性調(diào)節(jié)LPS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。α-黑色素細胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hornone,α-MSH)具有很強的抗LPS功能,但是確切的作用機制還不清楚。本實驗主

2、要觀察α-MSH對LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細胞NO釋放及CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達的影響,進一步揭示α-MSH抗LPS的作用機制。
　　方法：實驗采用半定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測LPS誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細胞CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達水平及給予α-MSH后對CD14、TLR4和SOCS-3基因表達的影響；同時留取細胞培養(yǎng)液上清,用Griess試劑檢測LPS誘導(dǎo)的小鼠腹

3、腔巨噬細胞NO生成量的變化和α-MSH對其影響。
　　結(jié)果：未受刺激的正常小鼠腹腔巨噬細胞釋放少量NO；LPS刺激后NO的生成量顯著增加(P<0.01),若同時給與α-MSH后,LPS誘導(dǎo)NO的生成作用則完全被阻斷(P<0.01)。正常靜息小鼠腹腔巨噬細胞只表達少量的CD14和TLR4 mRNA,給予LPS刺激后6h,兩者表達明顯增強(P<0.01),并且其表達量隨著LPS刺激時間的增加維持在高水平,24h達到峰值,在48h CD

4、14 mRNA的表達恢復(fù)到正常細胞的基線水平,而TLR4 mRNA的表達仍然維持在高水平。若LPS(10ug/mL)刺激的同時給予α-MSH,CD14和TLR4 mRNA的表達則明顯被抑制(P<0.05),而且α-MSH這種效應(yīng)還與其使用濃度有關(guān),0.1nmol/Lα-MSH不影響LPS誘導(dǎo)的CD14和TLR4 mRNA的表達,但當α-MSH的濃度達到1、10、100nmol/L則能顯著抑制CD14和TLR4 mRNA的表達(P<0.0

5、5),但各個濃度組之間的抑制作用沒有差別(P>0.05)。另外,在未受刺激小鼠腹腔巨噬細胞SOCS-3 mRNA有低水平的表達；10μg/mL LPS作用3h,SOCS-3 mRNA的表達明顯高于正常對照組(P<0.01)；若同時給予α-MSH,SOCS-3 mRNA的表達則顯著低于LPS組(P<0.01)。單獨給予α-MSH刺激的小鼠腹腔巨噬細胞,NO釋放及CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達與空白對照組沒有差異(P>0.0

6、5)。
　　結(jié)論：α-MSH抗LPS的效應(yīng)與其干擾LPS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵受體的表達有關(guān)。LPS在啟動炎癥的過程中可能通過TLR4激活SOCS-3介導(dǎo)的負調(diào)節(jié)機制,而α-MSH登南大學(xué)碩士學(xué)位論文。一MsH對LPs誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細胞CD14、TLR4和SOCS一3 mRNA表達的影響可能由于抑制CD14、TLR4 mRNA的表達而下調(diào)SocS一3 mRNA的表達,說明Q一MSH的抗內(nèi)毒素作用不是通過SocS蛋白介導(dǎo)的。a一MSH可