人參皂甙腸道代謝物Compound K通過(guò)Bid介導(dǎo)的線粒體通路誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡機(jī)制.pdf

1、廈門(mén)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫(xiě)作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門(mén)大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范(試行)》。另外，該學(xué)位論文為()課題(組)的研究成果，獲得()課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在()實(shí)驗(yàn)室完成。(請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫(xiě)課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。)坳＼翼兒，各奎陽(yáng)@∥人年明

2、∥聲訓(xùn)摘要肝癌是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，它嚴(yán)重威脅著人類的健康。然而，由于肝癌本身所具有的生物學(xué)特性，使其成為目前尚缺乏有效治療手段的疾病。CompoundK(20O—betaDglucopyranosyl20(s)protopanaxadiol，CK)，又稱為IH901或M1，是二醇型人參皂甙在腸道細(xì)菌作用下的最終代謝產(chǎn)物。研究發(fā)現(xiàn)，CK具有廣泛的藥理作用。其中，它在抗腫瘤方面所具有的藥理價(jià)值尤其引人注目。研究證實(shí)，CK對(duì)肝癌、肺癌、大腸

3、癌及神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。Bid(BH3interactingdeathagonist)是一個(gè)只含BH3結(jié)構(gòu)域的具有多種功能的Bcl2家族成員。研究認(rèn)為，Bid在促進(jìn)細(xì)胞凋亡和DNA損傷修復(fù)中具有雙重功能。同時(shí)，它可以通過(guò)激活不同的信號(hào)通路起到促進(jìn)或抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的效果，且不同研究體系也可能導(dǎo)致Bid表現(xiàn)出不同的生物學(xué)功能。本論文以人肝癌細(xì)胞系BEL7401、SMMC及裸鼠荷胃癌模型為研究對(duì)象。首先采用MTT法分別測(cè)定

4、兩種細(xì)胞系經(jīng)不同濃度CK處理24h和50Itmol／LCK處理不同時(shí)間后的細(xì)胞增殖存活率。結(jié)果表明，CK對(duì)BEL7402和SMMC7721細(xì)胞具有明顯的存活抑制作用，它們的增殖存活率與CK呈劑量時(shí)間依賴關(guān)系。為了探討CK是否具有誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的能力，我們采用Hoechst33342染色后經(jīng)熒光顯微鏡觀察和AnnexinV／PI雙染經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)相結(jié)合的方法，研究證實(shí)CK可以有效誘導(dǎo)BEL7402和SMMC7721細(xì)胞發(fā)生凋亡。

5、同時(shí)，我們還采用PI單染經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)的方法，研究證實(shí)CK可以有效誘導(dǎo)BEL7402和SMMC7721發(fā)生細(xì)胞周期G2期阻滯。為了闡明CK誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，我們采用WesternBlot的方法對(duì)經(jīng)不同濃度CK處理24h的BEL7402和SMMC7721細(xì)胞全蛋白進(jìn)行分析，結(jié)果表明CK主要是通過(guò)線粒體介導(dǎo)的凋亡通路來(lái)誘導(dǎo)BEL7402和SMMC7721細(xì)胞發(fā)生凋亡。為了進(jìn)一步了解CK激活線粒體通路誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制