梔子浸膏治療兔膝骨性關(guān)節(jié)炎的實驗研究.pdf

1、目的：通過觀察梔子浸膏對兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)軟骨形態(tài),軟骨基質(zhì)中Ⅱ型膠原和蛋白多糖含量，軟骨、滑膜、血清及關(guān)節(jié)液中IL-1表達(dá)的影響，探討其治療骨關(guān)節(jié)炎的作用機制，為梔子治療骨關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù)。 方法：健康六月齡大耳白兔35只，雄性18只，雌性17只，雌雄各半，體重1.5～2.0kg，隨機分為5組：正常對照組（A組）、模型組（B組）、高劑量組（C組）、中劑量組（D組）、低劑量組（E組）。A組打開關(guān)節(jié)腔后不作任何處理逐層縫合手術(shù)

2、切口，B、C、D、E四組行改良Hulth法造模，A組打開關(guān)節(jié)腔后不作任何處理逐層縫合手術(shù)切口，術(shù)后每天給予青霉素40萬U/只肌肉注射，連續(xù)7天，預(yù)防感染。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，每日驅(qū)趕各組實驗動物活動0.5h，2次/天，術(shù)后5周,對兔膝關(guān)節(jié)進(jìn)行X線攝片證實判斷造模成功。A與B組給予生理鹽水2ml/ kg·d灌胃，C、D、E組分別給予600mg/kg·d、300 mg/ kg·d、150 mg/ kg·d梔子浸膏灌胃，A與B組給予生理鹽水2m

3、l/ kg·d灌胃，連續(xù)給藥3周后，每組隨機抽取實驗動物2只，拍攝兔膝關(guān)節(jié)X線片；將全部動物處死前，分別采集關(guān)節(jié)液、血液檢測IL-1β含量；對關(guān)節(jié)軟骨行組織學(xué)觀察、免疫組織化學(xué)法檢測IL-1及Ⅱ型膠原表達(dá)情況；取滑膜行免疫組織化學(xué)法檢測IL-1含量；Masson染色與甲苯胺藍(lán)染色分別檢測軟骨基質(zhì)中膠原和蛋白多糖含量；并對軟骨細(xì)胞行透射電鏡進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察。所有數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析處理。 結(jié)果：（1）X線片觀察 A組關(guān)節(jié)無明顯變化；B

4、組關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)間隙明顯變窄，關(guān)節(jié)面粗糙變形，關(guān)節(jié)邊緣有骨贅形成，軟骨下骨骨密度明顯增高；C、D與E組關(guān)節(jié)退行性變化較B組輕。（2）肉眼、光鏡、透射電鏡觀察與A組相比，B組關(guān)節(jié)軟骨呈明顯退行性變，退變程度重；C、D、E組關(guān)節(jié)軟骨退行性變程度較B組輕；C、D、E組中C組關(guān)節(jié)軟骨退變程度最輕，E組關(guān)節(jié)軟骨退變程度最重，D組變化介于C與E組之間。（3）Pelletier JP及Mankin’s評分與A組相比，B組關(guān)節(jié)軟骨Pelletier JP及M

5、ankin’s評分顯著升高（P< 0.05）；C、D、E組關(guān)節(jié)軟骨評分都較B組低（P< 0.05）；C、D、E組間關(guān)節(jié)軟骨評分有差異（P< 0.05）。（4）軟骨基質(zhì)中蛋白多糖含量 A、C、D與E組蛋白多糖含量明顯高于B組（P<0.05），C、D、E組間蛋白多糖含量有差異（P< 0.05）。（5）軟骨基質(zhì)中膠原含量 A、C、D與E組膠原含量明顯高于B組（P<0.05），C、D、E組間膠原含量有差異（P< 0.05）。（5）免疫組化SP法

6、檢測關(guān)節(jié)軟骨Ⅱ型膠原 A、C、D與E組Ⅱ型膠原含量明顯高于B組（P<0.05）。（66）免疫組化SP法檢測關(guān)節(jié)軟骨IL-1 與B組比較A、C、D與E組IL-1含量明顯降低（P<0.05），C、D、E組間IL-1含量有差異（P< 0.05）。（77）免疫組化SP法檢測關(guān)節(jié)滑膜IL-1 A、C、D與E組較B組滑膜IL-1含量低（P<0.05），C、D、E組間IL-1含量有差異（P< 0.05）。（88）ELISA法檢測血清與關(guān)節(jié)液IL-1β