OA護(hù)膝防治膝骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研制OA護(hù)膝，并通過觀察OA護(hù)膝對骨性關(guān)節(jié)炎細(xì)胞因子、基質(zhì)溶解素、透明質(zhì)酸、氧自由基代謝、關(guān)節(jié)軟骨宏微觀結(jié)構(gòu)變化和細(xì)胞增殖、凋亡的影響，探討其防治膝骨性關(guān)節(jié)炎的機(jī)制及療效。 方法：1.OA護(hù)膝的研制：根據(jù)中醫(yī)“寒者熱之”、“瘀者通之”的治則，以PIC16F630單片機(jī)為核心，電路主要由升壓、輸出、單片機(jī)控制以及電熱軟膜4部分組成，通過鍵盤設(shè)定單片機(jī)產(chǎn)生不同幅度和頻率的動(dòng)態(tài)變頻疏密波進(jìn)行治療，30min后單片機(jī)內(nèi)部定時(shí)器中斷

2、，自動(dòng)關(guān)機(jī)。2.實(shí)驗(yàn)研究：日本大耳白兔60只，隨機(jī)分為2組，即：正常組(10只)和手術(shù)組(50只)。采用改良Hulth法復(fù)制膝骨性關(guān)節(jié)炎模型，術(shù)后隨機(jī)分為5組，即模型組、對照組(微波組)、實(shí)驗(yàn)1組(電組)、實(shí)驗(yàn)2組(熱組)、實(shí)驗(yàn)3組(護(hù)膝組)，并行對應(yīng)治療。8周后，分別測定關(guān)節(jié)滑液IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA濃度，及血液MDA、SOD、NO濃度。16周后，分別測定關(guān)節(jié)滑液IL—1β、IL-6、TNF—α、MMP-3

3、、HA濃度，關(guān)節(jié)滑膜及血液MDA、SOD、NO濃度，并用CR片、光鏡、透射電鏡、Tunel法、PCNA進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，同時(shí)用RT—PCR檢測關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Bcl-2、P53的mRNA相對表達(dá)水平。 結(jié)果：1.OA護(hù)膝的研制：護(hù)膝輸出的疏密波可控制由2～300Hz不同頻率刺激脈沖組成，脈沖寬度在100～150 μs之間，輸出正負(fù)向?qū)ΨQ的刺激脈沖，采用可充電的手機(jī)電池(3.7V)供電，單片機(jī)定時(shí)，30min自動(dòng)關(guān)機(jī)。電熱軟膜工作時(shí)

4、的溫度控制在40℃左右。2.實(shí)驗(yàn)研究：模型組、對照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組關(guān)節(jié)液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、血液MDA、NO濃度均高表達(dá)，含量16周明顯高于8周時(shí)，而關(guān)節(jié)液HA和血液SOD濃度均低表達(dá)，含量16周明顯低于8周時(shí)，16周時(shí)關(guān)節(jié)滑膜中MDA、NO濃度、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞P53的mRNA相對表達(dá)水平、AI均呈高表達(dá)，而SOD濃度、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Bcl-2的mRNA相對表達(dá)水平、PI均低表達(dá)，與正常組有顯著性

5、差異(P<0.01，P<0.05)。8周時(shí)，關(guān)節(jié)液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA，血液中MDA、NO、SOD含量，對照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組與模型組有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)；對照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組與實(shí)驗(yàn)3組有顯著性差異(P<0.05)。16周時(shí)，關(guān)節(jié)液中IL-1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA，血液和關(guān)節(jié)滑膜中MDA、NO、SOD含量，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Bcl-2、P53的mRN

6、A相對表達(dá)水平，AI、PI，對照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、實(shí)驗(yàn)3組與模型組有顯著性差異(P<0.01，P<0.05)：對照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組與實(shí)驗(yàn)3組有顯著性差異(P<0.05)。16周時(shí)與8周時(shí)，關(guān)節(jié)液中IL一1β、IL-6、TNF—α、MMP-3、HA，血液中MDA、NO、SOD含量，實(shí)驗(yàn)3組間比較有顯著性差異(P<0.05)。CR片顯示：正常組關(guān)節(jié)間隙正常，關(guān)節(jié)面平整光滑，無骨贅：模型組內(nèi)側(cè)間隙明顯變窄，有明顯骨贅；光鏡顯示：正

7、常組關(guān)節(jié)軟骨四層結(jié)構(gòu)清晰可辨，軟骨細(xì)胞排列整齊呈柱狀，染色質(zhì)分柿均勻，細(xì)胞核清晰：模型組關(guān)節(jié)軟骨層變薄，部分區(qū)域軟骨細(xì)胞核固縮、壞死，軟骨細(xì)胞排列紊亂，四層結(jié)構(gòu)不易分辨；電鏡顯示正常組軟骨細(xì)胞呈橢圓形，細(xì)胞及胞膜完整，包質(zhì)內(nèi)可見豐富粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體，細(xì)胞核完整，染色質(zhì)分布均勻：模型組軟骨細(xì)胞明顯固縮且外形不規(guī)則，細(xì)胞周暈消失，胞漿內(nèi)細(xì)胞器凝成高電子密度的片狀物不易分辨，細(xì)胞核不規(guī)則，染色質(zhì)濃聚，散裂于核中：實(shí)驗(yàn)3組內(nèi)側(cè)間隙變

8、窄，關(guān)節(jié)邊緣有輕微骨贅，關(guān)節(jié)面粗糙變形，軟骨細(xì)胞輕度萎縮，核內(nèi)異染色質(zhì)增多，胞質(zhì)內(nèi)可見脂滴及微絲出現(xiàn)。對照組、實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組介于模型組、實(shí)驗(yàn)3組之間。免疫組化觀察結(jié)果：正常組、實(shí)驗(yàn)3組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組、對照組、模型組TUNEL陽性率逐漸增高，PCNA陽性率逐漸降低。結(jié)論：1.以PIC16F630單片機(jī)為系統(tǒng)控制核心的OA護(hù)膝，可通過鍵盤按鈕控制輸出信號(hào)的頻率、脈沖寬度、強(qiáng)度和工作時(shí)間。2.OA護(hù)膝采用低頻溫?zé)釀?dòng)態(tài)變頻疏密波，針對