電壓依賴性鉀通道在Aβ-,25-35-誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡中的作用及相關(guān)藥理學(xué)研究.pdf

1、鉀通道是許多重要疾病的治療靶點(diǎn),近來出現(xiàn)了許多分析平臺(tái)用于篩選鉀通道調(diào)節(jié)劑.但所有篩選結(jié)果都需進(jìn)行電生理實(shí)驗(yàn)做最后的驗(yàn)證.在本文中,我們采用了膜片鉗技術(shù)對(duì)我室高通量篩選結(jié)果進(jìn)行了進(jìn)一步篩選和驗(yàn)證.本論文的主要研究結(jié)果如下:第一部分鉀通道在Aβ<,25-35>誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡中的作用一、鉀通道在Aβ<,25-35>誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元凋亡中的作用以MTT法和Hoechst33342染色法分別檢測(cè)細(xì)胞的存活率和凋亡的發(fā)生率.二、Kv1.5、

2、Kv2.1鉀通道在Aβ<,25-35>引起的細(xì)胞毒性中的作用Aβ<,25-35> 30 μM和60 μM孵育48 h使穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Kv1.5、Kv2.1鉀通道功能基因的HEK293細(xì)胞的存活率明顯降低,而對(duì)未轉(zhuǎn)染通道基因的天然HEK293細(xì)胞存活率無明顯影響.TEA(5 mM)及高濃度(25 mM)KCl可明顯減輕30μM Aβ<,25-35>引起的轉(zhuǎn)染鉀通道基因的HEK293細(xì)胞存活率的降低.結(jié)論:Aβ<,25-35>引起的細(xì)胞毒性可能與

3、Kv1.5和Kv2.1鉀通道有關(guān).第二部分克隆Kv1.5、Kv2.1鉀通道的特性及藥理學(xué)一、克隆Kv1.5、Kv2.1鉀通道的電生理特性克隆Kv1.5、Kv2.1的通道電流和海馬神經(jīng)元的I<,K>電流都具有典型的緩慢激活和緩慢失活的延遲整流性鉀電流特性.二、Donepezil和galantamine對(duì)克隆Kv1.5、Kv2.1鉀通道的作用結(jié)論:Donepezil和galantamine劑量依賴性地抑制克隆Kv2.1鉀通道,而對(duì)Kv1.5

4、鉀通道無明顯影響.Donepezil和galantamine在體內(nèi)可能通過阻斷Kv2.1鉀通道抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡,增加腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)釋放,增強(qiáng)其對(duì)AD的療效.第三部分丁基苯酞對(duì)鉀通道的作用及新藥篩選一、丁基苯酞對(duì)海馬神經(jīng)元鉀通道和克隆Kv1.5、Kv2.1鉀通道的作用應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),觀察丁基苯酞對(duì)海馬神經(jīng)元I<,K>和I<,A>的作用.二、應(yīng)用膜片鉗技術(shù)進(jìn)行新藥篩選鉀離子通道在細(xì)胞功能中發(fā)揮關(guān)鍵作用,是非常重要的藥物靶點(diǎn).本實(shí)驗(yàn)中我們