電壓依賴性鈣通道在人類弱精子癥精子中的改變.pdf

1、目的：探討電壓依賴性鈣通道病變導(dǎo)致人類弱精子癥的發(fā)生作用及其機(jī)制。
　　 方法：將不同濃度的特異性L-型鈣通道拮抗劑硝苯地平在體外與生育男性經(jīng)上游優(yōu)化處理的精液分別共同孵育 10、20、30、60 min，采用計(jì)算機(jī)輔助的精子分析系統(tǒng)分別檢測精子的運(yùn)動參數(shù)，包括精子活率、精子活力分級、畸形率、平均路徑速度、精子側(cè)擺幅度和擺動幅度；然后應(yīng)用半定量反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)分別檢測正常人類運(yùn)動精子和弱精子癥精子中各

2、類型電壓依賴性鈣通道的功能性亞單位α1 mRNA相對表達(dá)量的變化；最后應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)(real-time qPCR)、免疫印跡(Western blotting)和熒光免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分別檢測L型VDCC功能性 α1C亞單位在正常人類運(yùn)動精子和弱精子癥精子中的變化。
　　 結(jié)果：硝苯地平在體外既對人精子形態(tài)有明顯性改變，也對精子活率、精子活力分級(a+b 級百分率)、精子側(cè)擺幅度和擺動幅度等指標(biāo)的影響差異有

3、非常顯著性(p<0.001)；與正常運(yùn)動精子相比，弱精子癥精子中電壓依賴性鈣通道的α1B、α1C、α1E、α1G、α1H mRNA表達(dá)的差異具有極顯著意義(p<0.01)，其中弱精子癥精子中的L型VDCC α1C分別在分子水平、蛋白水平和細(xì)胞水平上的差異都存在著顯著性變化。
　　 結(jié)論：L-型鈣通道拮抗劑在體外可直接導(dǎo)致可逆性的精子運(yùn)動能力下降，L型和/或非L型電壓依賴性鈣通道都存在于精子細(xì)胞膜上，是調(diào)控正常人類精子運(yùn)動的主要電