質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1的發(fā)現(xiàn).pdf

1、近年來(lái)，隨著多重耐藥革蘭陰性菌的增加，抗革蘭氏陰性菌感染藥物的選擇越來(lái)越有限。多粘菌素作為“最后一道防線(xiàn)”被重新用于臨床治療多重耐藥革蘭氏陰性菌引起的感染。細(xì)菌對(duì)多粘菌素類(lèi)藥物的耐藥機(jī)制往往由染色體介導(dǎo)，但本研究在國(guó)際上，首次發(fā)現(xiàn)了可水平轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥機(jī)制MCR-1。
　　以上海某一豬場(chǎng)分離的大腸桿菌為研究對(duì)象，隨機(jī)選取一株黏菌素的最小抑菌濃度為8 mg/L的菌株SHP45進(jìn)行研究。采用PCR方法檢測(cè)引起多粘菌素耐藥的

2、突變基因（pmrAB，phoPQ和mgrB），結(jié)果未檢測(cè)到與多粘菌素耐藥有關(guān)的基因突變。通過(guò)接合實(shí)驗(yàn)成功將黏菌素耐藥性質(zhì)粒（pHNSHP45）轉(zhuǎn)移到受體菌中，接合頻率高達(dá)10-1~10-3，且pHNSHP45質(zhì)粒能通過(guò)接合或轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入肺炎克雷伯菌中，并介導(dǎo)黏菌素耐藥。通過(guò)高通量測(cè)序獲得該質(zhì)粒全序列，發(fā)現(xiàn)該質(zhì)粒全長(zhǎng)為62105 bp,其G+C為43.0％，具有典型的IncI2型質(zhì)粒骨架，并發(fā)現(xiàn)一個(gè)1626 bp的開(kāi)放閱讀框與插入序列ISAp

3、I1相連，推測(cè)此為該質(zhì)粒從外源獲得的序列，該基因被命名為mcr-1。氨基酸序列分析結(jié)果顯示MCR-1與磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移酶有60%左右的相似性，細(xì)菌脂質(zhì)A的ESI-MS分析結(jié)果證實(shí)了MCR-1功能，即通過(guò)修飾細(xì)菌細(xì)胞膜上的脂質(zhì)A而介導(dǎo)對(duì)黏菌素耐藥。對(duì)原菌SHP45和接合子進(jìn)行傳代實(shí)驗(yàn)，采用S1-PFGE和雜交的方法檢測(cè)該質(zhì)粒的穩(wěn)定性，分別在含黏菌素和不含黏菌素的LB溶液傳代培養(yǎng)14代，發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒pHNSHP45仍能夠穩(wěn)定地存在接合子和原菌SH

4、P45中。
　　采用PCR方法進(jìn)一步檢測(cè)了mcr-1在動(dòng)物源大腸桿菌中的傳播及擴(kuò)散情況。PCR結(jié)果顯示，在2011~2014年生肉分離的523份大腸桿菌檢測(cè)到78株（15%）攜帶 mcr-1，屠宰前動(dòng)物分離的804份大腸桿菌檢測(cè)到166株（21%）攜帶 mcr-1，表明mcr-1已在動(dòng)物源腸桿菌中廣泛傳播，且陽(yáng)性樣本的比例在逐年增加。
　　本研究在國(guó)際上首次發(fā)現(xiàn)了質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1，mcr-1位于接合性Inc