阿托伐他汀對老年性癡呆早期模型大鼠額葉皮層炎癥因子表達的影響.pdf

1、目的：
　　 以去卵巢并注射D-半乳糖的大鼠為老年性癡呆早期模型，觀察阿托伐他汀對大鼠額葉皮層炎癥因子IL-6、TNF-α，抗氧化酶SOD2、CAT的表達及凋亡相關(guān)蛋白Bxl-2、Bax含量的影響。
　　 方法：
　　 1、實驗動物分組
　　 選用4月齡雌性SD大鼠40只，隨機分為2組：假手術(shù)組（Sham組）、去卵巢組（OVX組），其中Sham組8只、OVX組32只。Sham組為雙側(cè)去除少量卵巢上脂肪組織

2、，OVX組為去除雙側(cè)卵巢。手術(shù)2周后，Sham組腹腔注射生理鹽水0.5 ml/d；OVX組腹腔注射D-半乳糖20 mg·0.5 ml/d。注射6周后，將OVX組隨機分為4組：病理對照組（OD），阿托伐他汀組（ODA），Vc+Ve組（ODV）及旋覆花組（ODI），每組8只。各組均灌胃4周，灌胃劑量如下：ODA組7.2mg/Kg·d，ODV組Vc45 mg/Kg·d Ve27 mg/Kg·d，ODI組0.9 g/Kg·d，Sham組及OD組

3、蒸餾水1.5 ml/Kg·d。灌胃過程中Sham組繼續(xù)注射生理鹽水，其余4組繼續(xù)注射D-半乳糖，所有各組均在灌胃4周后處死。整個實驗周期共為12周（術(shù)后到處死）。
　　 2、行為學測試
　　 注射D-半乳糖及生理鹽水四周后，用Morris水迷宮對所有大鼠進行學習記憶訓練，4次/天，共四天。注射D-半乳糖及生理鹽水六周后同樣條件下進行Morris水迷宮實驗1天，方法同上，以后三次逃避潛伏期（escape latencv）的

4、平均值作為評價大鼠空間學習記憶能力的指標。動物處死前一天，同樣條件下水迷宮實驗1天，記錄大鼠后三次逃避潛伏期的平均值，作為評價大鼠空間學習記憶能力的指標。
　　 3、組織標本的獲取及指標測定
　　 3.1組織標本的獲取
　　 麻醉大鼠，開顱并迅速分離額葉皮層置于液氮中，于-80℃低溫冰箱保存，用于組織總RNA和蛋白的提取。
　　 3.2 mRNA的測定
　　 用Trizol法提取額葉皮層組織總RN

5、A。用β-actin作為內(nèi)參照，RT-PCR法測定額葉皮層IL-6mRNA、TNF-αmRNA、SOD2 mRNA、 CAT mRNA的相對表達量。
　　 3.3蛋白的測定
　　 提取額葉皮層組織蛋白并用Bradford法測定蛋白含量，以每毫升樣品中的毫克蛋白量（mg/ml）表示。以β-actin為內(nèi)參照，用western-blotting法分別檢測Bcl-2和Bax的相對含量。
　　 結(jié)果：
　　 1、

6、大鼠學習記憶能力的變化
　　 各組大鼠逃避潛伏期隨訓練次數(shù)增加而縮短，取后三次逃避潛伏期的平均值進行觀察，OVX組逃避潛伏期明顯長于Sham組（P<0.05）；給藥后，ODA+ODV+ODI組逃避潛伏期明顯短于OD組（P<0.05）。
　　 2、大鼠額葉皮層IL-6mRNA水平的變化
　　 OD組的IL-6mRNA的相對表達量比Sham組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義；而與oD組相比，ODA組、ODV組和oDI組的

7、IL-6mRNA的相對表達量均明顯降低；在用藥各組中，ODV組的IL-6mRNA的相對表達量與Sham組相比無顯著性差異。
　　 3、大鼠額葉皮層TNF-αmRNA水平的變化
　　 OD組的TNF-αmRNA的相對表達量比Sham組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義；而與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的TNF-αmRNA的相對表達量均明顯降低；而且三個用藥組的TNF-αmRNA的相對表達量與Sham組無統(tǒng)計學差異。<

8、br>　　 4、大鼠額葉皮層SOD2 mRNA水平的變化
　　 與Sham組相比，OD組的SOD2 mRNA的相對表達量明顯降低；與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的SOD2mRNA的相對表達量明顯升高；在用藥各組中，ODV組的SOD2 mRNA的相對表達量與Sham組相比無顯著性差異。
　　 5、大鼠額葉皮層CAT mRNA水平的變化
　　 OD組的CAT mRNA的相對表達量比Sham組明顯降低，差

9、異具有統(tǒng)計學意義；與OD組相比，ODA組和ODV組的CAT mRNA的相對表達量明顯升高，而ODI組的CAT mRNA的相對表達量與OD組相比無顯著性差異；在用藥各組中，ODA組和ODV組的CAT mRNA的相對表達量與Sham組相比無顯著性差異。
　　 6、大鼠額葉皮層Bcl-2相對含量的變化
　　 OD組的Bcl-2相對表達量比Sham組明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義；與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的Bcl

10、-2相對表達量無顯著差異；用藥各組Bcl-2相對表達量與Sham組相比均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 7、大鼠額葉皮層Bax相對含量的變化
　　 OD組的Bax相對表達量比Sham組顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義；與OD組相比，ODA組、ODV組和ODI組的Bax相對表達量明顯下降；用藥各組Bax相對表達量與Sham組相比均無顯著差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、阿托伐他汀，Vc+Ve，旋覆花能改善去