脈絡(luò)寧對(duì)老年性癡呆模型大鼠腦組織Sirt1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:以雙因素處理大鼠(去卵巢同時(shí)注射D-半乳糖)模擬早期老年性癡呆模型,觀察中藥復(fù)方脈絡(luò)寧和謝海洲方,西藥維生素(C+E)和阿托伐他汀藥物干預(yù)對(duì)大鼠腦組織Sirtl基因表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 1：動(dòng)物分組及取材:
　　 選用4月齡雌性SD大鼠48只,隨機(jī)分為2組:假手術(shù)組(Sham組)、去卵巢組(OVX組),其中Sham組8只、OVX組40只。Sham組為雙側(cè)去除少量卵巢上脂肪組織,OVX組為去除雙側(cè)

2、卵巢。手術(shù)后2周Sham組給予生理鹽水0.5ml/d,腹腔注射;OVX組給予D-半乳糖20mg·0.5ml/d,腹腔注射。注射6周后將OVX組再次隨機(jī)分為5組:脈絡(luò)寧組(ODM),謝海洲方組(ODZ),V.C+V.E組(ODV),阿托伐他汀組(ODA)及病理對(duì)照組(OD),每組8只。各組均灌胃4周,灌胃劑量如下:ODM組脈絡(luò)寧注射液1.8ml/Kg.d,ODZ組謝海洲方16.83 g/kg.d,ODV組V.C45mg/Kg.d,V.E2

3、7mg/Kg.d,ODA組7.2mg/Kg·d,Sham組及OD組分別灌服蒸餾水1.5ml/Kg.d。灌胃過(guò)程中OVX組及Sham組繼續(xù)分別給予D-半乳糖及生理鹽水注射。手術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)12周后處死。
　　 2：行為學(xué)測(cè)試
　　 注射D-半乳糖四周后,用Morris水迷宮對(duì)所有大鼠進(jìn)行訓(xùn)練,每天4次,每次間隔5分鐘,共四天,做為學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練。注射D-半乳糖六周后進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試,一天內(nèi)測(cè)試4次,每次間隔5分鐘,共

4、測(cè)試一天。以后三次逃避潛伏期(escape latency)的平均值作為評(píng)價(jià)大鼠記憶能力的指標(biāo)。動(dòng)物處死前一天,同樣條件水迷宮1天,方法同上,記錄大鼠逃避潛伏期的平均值,作為評(píng)價(jià)大鼠空間記憶能力的指標(biāo)。
　　 3：組織標(biāo)本的獲取及指標(biāo)測(cè)定
　　 3.1：組織標(biāo)本的獲取麻醉大鼠,開(kāi)顱并迅速分離顳葉右側(cè)皮層置于液氮中,于-80℃低溫冰箱保存,用于組織總RNA及總蛋白的提取。
　　 3.2： Sirtl基因mRNA表達(dá)

5、的測(cè)定用Trizol法提取總RNA。以GAPDH做內(nèi)參,RT-PCR法測(cè)定顳葉右側(cè)腦組織Sirtl基因在mRNA水平的相對(duì)表達(dá)量。
　　 3.3： Sirtl蛋白表達(dá)的測(cè)定提取顳葉右側(cè)皮層腦組織總蛋白并用Lowry法測(cè)定蛋白含量,以每毫升樣品中的毫克蛋白量(mg/ml)表示。以GAPDH為內(nèi)參照,用western-blotting法分別檢測(cè)各組Sirtl的相對(duì)表達(dá)量。
　　 4：數(shù)據(jù)處理
　　 所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)

6、間的比較,應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x-)±s)表示,多組間均值的比較用單因素方差分析。經(jīng)檢驗(yàn)各組方差齊,進(jìn)一步組間比較選用SNK多重比較檢驗(yàn),α=0.05。經(jīng)檢驗(yàn)方差不齊,進(jìn)一步組間比較選用Dunnett T3多重比較檢驗(yàn),α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1：學(xué)習(xí)記憶能力的變化
　　 Sham組逃避潛伏期為8.7±4.1,OVX+D-gal組逃避潛伏期為15.2±8.1。

7、與Sham組相比,OVX+D-gal組逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)(P＜0.05);給藥后,ODM+ODZ+ODV+ODA組逃避潛伏期為9.1±6.5,OD組逃避潛伏期為16.7±12.3。可見(jiàn),與OD組相比,ODM+ODZ+ODV+ODA組逃避潛伏期明顯縮短,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2：腦組織Sirtl mRNA水平的變化
　　 OD組的Sirtl mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.464±0.063,Sham組的S

8、irtlmRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.624±0.030,與Sham組相比,OD組的SirtlmRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);ODM組的Sirtl mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.968±0.127、0DZ組的Sirtl mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.859±0.119,ODV組的Sirtl mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.790±0.076,ODA組的Sirtl mRNA相對(duì)表達(dá)量為0.603±0.091。與OD組相比,

9、ODM組、ODZ組,ODV組和ODA組的Sirtl mRNA相對(duì)表達(dá)量均有不同程度的升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3：腦組織Sirtl蛋白相對(duì)含量的變化
　　 OD組的Sirtl相對(duì)表達(dá)量為0.581±0.199,Sham組Sirtl相對(duì)表達(dá)量為0.906±0.085,與Sham組相比,OD組Sirtl相對(duì)表達(dá)量明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)ODM組的Sirtl的相對(duì)表達(dá)量為2.023±

10、0.288、ODZ組的Sirtl的相對(duì)表達(dá)量為1.818±0.287,ODV組的Sirtl的相對(duì)表達(dá)量為1.605±0.225,ODA組的Sirtl相對(duì)表達(dá)量為1.033±0.091。與OD組相比,ODM組、ODZ組、ODV組、ODA組的Sirtl相對(duì)表達(dá)量均有不同程度的增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1：本模型大鼠顳葉右側(cè)皮層目標(biāo)蛋白Sirtl mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均降低。