解毒補腎法對老年性癡呆模型大鼠抗炎作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 從毒侵腦府、腦府受損，腎精虧虛、腦失所養(yǎng)理論探討AD的發(fā)病機理，遵循中醫(yī)“虛則補之，實則瀉之”“標本兼治”的治療原則，提出解毒補腎法治療AD。建立D-gal致亞急性衰老模型與Aβ25-35海馬雙側(cè)定位注射制備復(fù)合型AD大鼠模型。通過觀察解毒補腎法對AD模型大鼠學習記憶能力、腦組織病理形態(tài)、細胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量、CRP的含量、NF-κB及iNOS陽性表達等相關(guān)指標的影響，探討解毒補腎法對A

2、D模型大鼠的治療效果和作用機理，為中醫(yī)藥治療AD提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 將8月齡SD雄性大鼠90只，隨機分為6組，即正常組、假手術(shù)組、模型組、腦復(fù)康治療組(簡稱腦復(fù)康組)、千層塔合劑低劑量組(簡稱千低組)、千層塔合劑高劑量組(簡稱千高組)，每組15只。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，正常組不予處理，假手術(shù)組頸部皮下注射生理鹽水，模型組、腦復(fù)康組、千高組、千低組大鼠頸部皮下注射D-gal致大鼠亞急性衰老，6周后，大

3、鼠海馬雙側(cè)定位注射Aβ25-35制備復(fù)合型AD大鼠模型。手術(shù)3天后，各手術(shù)組大鼠經(jīng)相應(yīng)藥物灌胃治療4周，正常組常規(guī)喂養(yǎng)。治療4周后，各組大鼠進行水迷宮行為學試驗，光鏡、電鏡下觀察各組大鼠海馬組織病理形態(tài)學改變，放射免疫方法檢測各組大鼠海馬組織IL-1β、IL-6、TNF-α的含量，ELISA法檢測各組大鼠血清CRP的含量，免疫組化法檢測各組大鼠海馬組織NF-κB、iNOS的陽性表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.行為學實驗，

4、各組大鼠定位航行實驗的平均潛伏期、20％、40％區(qū)域百分比，空間探索實驗的潛伏期、象限百分比、跨越原平臺位置的次數(shù)結(jié)果，正常組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；模型組與正常組比較有顯著性差異(P＜0.01)，表明該造模方法能顯著降低AD模型大鼠的學習記憶能力；千高組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)，表明千高組能顯著改善AD模型大鼠學習記憶能力；千低組與腦復(fù)康組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；千高組與腦復(fù)康組比

5、較有顯著性差異(P＜0.01)，表明千高組對于AD大鼠的學習記憶能力改善效果優(yōu)于腦復(fù)康組。表明此AD大鼠模型是成功的，解毒補腎法可顯著改善AD模型大鼠的學習記憶能力，其療效優(yōu)于腦復(fù)康組。
　　 2.電鏡、光鏡檢測，病理形態(tài)上，模型組主要表現(xiàn)為大鼠海馬神經(jīng)元變性壞死，顆粒空泡變性、核固縮、胞膜、核膜界限不清?？梢娋€粒體水腫，線粒體體積明顯增大，基質(zhì)變均勻、顏色變淺淡，基質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)多個亮區(qū)或全部變空，嵴變短變少甚至很難見到。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張

6、囊泡變。突觸數(shù)目明顯減少，腫脹變性。千高組與模型組比較有顯著改善，無神經(jīng)元凋亡，神經(jīng)元胞核清晰，細胞間連接較為緊密，胞漿中可見較為豐富的線粒體，僅輕微水腫，無顆?？张輼幼冃?。千低組與腦復(fù)康組病理形態(tài)較模型組有改善，但不如千高組改善明顯。表明解毒補腎法具有顯著改善AD模型大鼠海馬組織病理改變的作用。
　　 3.放免法檢測大鼠海馬組織細胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的含量，結(jié)果正常組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0

7、.05)；模型組含量較正常組與假手術(shù)組明顯升高(P＜0.01)，各治療組均能降低IL-1β、IL-6、TNF-α的含量，千高組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)，與腦復(fù)康組比較有顯著性差異(P＜0.01)，表明解毒補腎法可顯著降低AD模型大鼠細胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量，減輕AD模型大鼠腦組織的炎癥反應(yīng)。
　　 4. ELISA法檢測大鼠血清CRP含量，結(jié)果正常組與假手術(shù)組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.0

8、5)；模型組含量較正常組與假手術(shù)組明顯升高(P＜0.01)，治療各組均能降低CRP含量，千高組CRP含量最接近正常組，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)，與腦復(fù)康組比較有顯著性差異(P＜0.01)，千低組與腦復(fù)康組比較有顯著性差異(P＜0.01)。表明解毒補腎法可顯著降低AD模型大鼠CRP的含量。
　　 5.免疫組化法檢測AD模型大鼠海馬組織NF-κB、iNOS的陽性表達，結(jié)果模型組光鏡下見棕黃色顆粒最多，說明模型組NF-

9、κB、iNOS陽性表達最強，治療各組與模型組比較棕黃色顆粒均有減少，說明各治療組均能抑制NF-κB、iNOS陽性表達。治療組中千高組的棕黃色顆粒明顯減少，腦復(fù)康組與千低組的陽性表達與千高組比較又明顯要多，千低組與腦復(fù)康組比較差異不明顯。表明解毒補腎法可抑制AD大鼠海馬組織NF-κB、iNOS的陽性表達。
　　 結(jié)論：
　　 1.毒侵腦府、腦府受損，腎精虧虛、腦失所養(yǎng)是AD的基本病機，解毒補腎法是治療AD的有效可行方法。<

10、br>　　 2.D-gal致亞急性衰老模型與Aβ25-35海馬定位注射制備復(fù)合型AD大鼠模型不僅模擬出AD的行為學變化，而且模擬復(fù)制出AD主要的病理學、免疫學等多方面的改變，是一種可靠的動物模型。
　　 3.解毒補腎法能有效改善AD模型大鼠學習記憶能力；減輕AD模型大鼠病理形態(tài)學的改變；降低模型大鼠腦海馬組織IL-1β、IL-6、TNF-α，血清CRP的含量，抑制NF-κB、iNOS的陽性表達。
　　 4.解毒補腎法能