腎虛痰蒙清竅與老年性癡呆的關(guān)系及補腎化痰開竅法作用的研究.pdf

1、目的：
　　補腎化痰開竅法是中醫(yī)學(xué)的重要治法之一，在老年性癡呆的防治過程中起著重要作用。本文系統(tǒng)回顧和總結(jié)了古代醫(yī)家對老年性癡呆的認(rèn)識,認(rèn)為此病的基本病機是痰蒙清竅，腎元虧虛，屬本虛標(biāo)實之證。從腎虛痰蒙清竅理論探討老年性癡呆的發(fā)病機理和治療法則,本課題以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆動物模型，觀察補腎化痰開竅法對小鼠學(xué)習(xí)記憶水平、腦組織病理形態(tài)和泛素-蛋白酶體通路相的影響,探討補腎化痰開竅法對該模型的干預(yù)作用和作用機理,

2、旨在為補腎化痰開竅法防治老年病的研究提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.理論探討：整理與中醫(yī)補腎化痰開竅法有關(guān)的古今文獻，分析補腎化痰開竅法的概念、內(nèi)涵，探討補腎化痰開竅法的理論基礎(chǔ)，及其防治老年性癡呆的理論依據(jù)。
　　2.以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠為老年性癡呆動物模型，泛素-蛋白酶體途徑為研究靶點，研究補腎化痰開竅法對老年性癡呆的作用及其機制。觀察跳臺測試、Morris水迷宮測試對小鼠為行為學(xué)影響，檢測小

3、鼠的學(xué)習(xí)記憶能力；HE染色、免疫組織化學(xué)染色法觀測小鼠海馬組織泛素-蛋白酶體途徑病理學(xué)變化，用Western Blot法檢測小鼠海馬組織泛素-蛋白酶體途徑主要蛋白的含量；以RealTime-PCR檢測小鼠海馬組織泛素mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1. Morris水迷宮測試結(jié)果：
　　空白組比較,模型組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺時間明顯延長(P<0.01),游泳總路程明顯增加(P<0.01);與模型組比較,各組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺時間均

4、縮短(P<0.05),游泳總路程均減少(P<0.05);各給藥組與多奈哌齊組比較各組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺時間未見明顯差異(P>0.05),游泳總路程未見明顯差異(P>0.05)。益智溫膽組與菖蒲益智丸組比較,兩組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺時間未見明顯差異(P>0.05),游泳總路程未見明顯差異(P>0.05)。
　　2.跳臺測試實驗結(jié)果
　　給藥90天后，與空白組比較,模型組小鼠的在跳臺中錯誤次數(shù)明顯增加(P<0.01),潛伏期明顯縮短(P<0.

5、01)。與模型組比較,多奈哌齊組和其它各組小鼠的出錯次數(shù)明顯減少(P<0.01),多奈哌齊組、益智溫膽組和菖蒲益智丸組小鼠的潛伏期明顯延長(P<0.01)。與多奈哌齊組比較,益智溫膽組和菖蒲益智丸組小鼠的出錯次數(shù)和潛伏期無明顯差別(P>0.05);補腎組化痰組出錯次數(shù)和潛伏期有所差別(P<0.05)，化痰組潛伏期有所差別(P<0.05)。
　　3. HE染色
　　模型組主要表現(xiàn)為較明顯的腦神經(jīng)元變性、可見到神經(jīng)纖維纏結(jié)和淀粉

6、樣蛋白沉積斑塊。多奈哌齊組和補腎組對模型轉(zhuǎn)基因小鼠海馬病理形態(tài)影響不明顯,多奈哌齊組僅僅可以觀察到神經(jīng)元數(shù)量變化,以及細胞結(jié)構(gòu)排列較為整齊,補腎組神經(jīng)元形態(tài)排列較為整齊，結(jié)構(gòu)較多奈哌齊組完整。益智溫膽組、菖蒲益智丸組、化痰組對神經(jīng)元的保護,空泡變性以及細胞核增大也有一定好轉(zhuǎn),神經(jīng)細胞排列以及細胞形態(tài)明顯較好,神經(jīng)纖維纏結(jié)不明顯。
　　4.免疫組化
　　泛素陽性免疫產(chǎn)物定位于海馬區(qū)神經(jīng)元細胞漿內(nèi)。免疫組化結(jié)果顯示模型組、多奈哌

7、齊組切片內(nèi)海馬 CA1區(qū)可見大量泛素，補腎組海馬 CA1區(qū)也可見到有部分泛素的聚集；益智溫膽組與菖蒲益智丸組相差不多，二者最少?？瞻捉M小鼠海馬CA1區(qū)灰度值明顯較低（P＜0.01）；而多奈哌齊組與其相差無幾無明顯差異（P＞0.05）；益智溫膽組、補腎組、化痰組與菖蒲益智丸組小鼠海馬CA1區(qū)灰度值與其有明顯差異（P＜0.01）。
　　5.小鼠海馬組織Western Blot實驗結(jié)果
　　APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織泛素抗

8、體蛋白質(zhì)印跡檢測結(jié)果表示：與空白組比較，模型組小鼠海馬組織泛素相對表達量有顯著性差別（P＜0.01）。與模型組比較，多奈哌齊組海馬組織泛素相對表達量未見顯著性差異（P＞0.05）；模型組較其它各組均顯示表達量增加。
　　6.小鼠海馬組織Real Time-PCR實驗結(jié)果
　　與空白組比較，模型組泛素mRNA表達明顯上調(diào)，益智溫膽組、補腎組、化痰組、菖蒲益智丸組泛素mRNA均有不同程度的上調(diào)。與模型組比較，多奈哌齊組、益智溫膽